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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

[求助] 转基因PCR阳性检测

PCR检测过程中,电泳后条带很杂,质粒都有两条带,后来加入DMSO,质粒条带正常,但检测结果依然很多杂带,并且有时候一个目的条带都没有,用了很多方法,还是不怎么好,杂带依然多,应该如何调整,减少杂带的干扰?
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ssswzf

金虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火温度可以适当提高一些
2楼2016-04-11 11:35:43
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
来,上图吧,退火温度你做优化了么?模板是质粒?那应该特异性比较好才对

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2016-04-11 12:23:20
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hlxxym

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、提高退火温度
2、降低体系镁离子浓度
3、减少循环数
4、重新设计引物,提高引物特异性
4楼2016-04-11 12:39:23
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-11 12:23:20
来,上图吧,退火温度你做优化了么?模板是质粒?那应该特异性比较好才对

做了一个梯度,公司送过来的引物单上面的退火温度是59.8,我做了一个梯度,从56-62,但是只有56-58有带,就是不能消除杂带,但58以后的温度就没带了
5楼2016-04-13 20:54:33
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssswzf at 2016-04-11 11:35:43
退火温度可以适当提高一些

现在是56-60退火温度下的质粒都能跑出来,但是目的基因却没有带了,今天用的58,之前用的56、57,感觉都不行,还有其他方法么
6楼2016-04-14 16:25:33
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