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[求助]
大神们，求助RNA提取260/230低的问题。 已有6人参与
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用艾德莱的试剂盒提取植物组织RNA，260/280正常，可就是260/230比值太低，几乎都小于1。跑胶条带也正常，28s比18s亮。之前提的一直正常，不知这两次是怎么回事。请教各位这样的RNA还能用吗？我后期要反转为cDNA做荧光定量，这样会不会影响ct值和标准曲线啊。急急急，求建议。 发自小木虫IOS客户端 |
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:45:10
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260/230比值偏小，是有盐污染，解决的办法是： 在乙醇洗脱步骤时： 1、75％乙醇，4℃，7500g/min，离心5min； 2、倒掉乙醇，再加入75％乙醇，条件同上，做第二次洗脱（注意，这次EP管在离心机 里的摆放方向与第一次相反，以便能更全面的洗脱）； 3、再次掉转EP管在离心机中的方向（不再加入乙醇），7500g/min，4℃，离心3min 后，用200μl的枪小心吸去乙醇（注意不要吸到管底的RNA），然后开盖晾干乙醇即 可。 这样做后，比只用乙醇洗一次的效果要好很多，我们所提RNA用nanodrop测得260/230 值均在2.0左右。 注意倒掉乙醇后再离心一次，把沾在管壁的乙醇离下来 第三步很重要 |
6楼2016-04-11 19:37:56
18726912610
木虫 (小有名气)
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2楼2016-04-10 23:27:52
3楼2016-04-11 00:03:01
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:45:43
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230测的是盐浓度，做定量PCR的话要看你RNA的纯度和浓度，以及反转试剂盒的效率，一般浓度在500ng以上，纯度在1.7~2之间都没啥问题的。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-04-11 00:12:28
5楼2016-04-11 08:43:22
sandycool
铁虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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盐分等杂质太多，我是用了三次75%乙醇进行洗涤的，你可以试试。 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-04-11 21:09:41
8楼2016-04-11 21:34:11
fox19931109
新虫 (初入文坛)
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