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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 大神们，求助RNA提取260/230低的问题。
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一片丹心666

新虫 (初入文坛)

[求助] 大神们，求助RNA提取260/230低的问题。 已有6人参与

用艾德莱的试剂盒提取植物组织RNA，260/280正常，可就是260/230比值太低，几乎都小于1。跑胶条带也正常，28s比18s亮。之前提的一直正常，不知这两次是怎么回事。请教各位这样的RNA还能用吗？我后期要反转为cDNA做荧光定量，这样会不会影响ct值和标准曲线啊。急急急，求建议。

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1楼 2016-04-10 22:51:49
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

彼年那月123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:45:10
260/230比值偏小，是有盐污染，解决的办法是：
在乙醇洗脱步骤时：
1、75％乙醇，4℃，7500g/min，离心5min；
2、倒掉乙醇，再加入75％乙醇，条件同上，做第二次洗脱（注意，这次EP管在离心机
里的摆放方向与第一次相反，以便能更全面的洗脱）；
3、再次掉转EP管在离心机中的方向（不再加入乙醇），7500g/min，4℃，离心3min
后，用200μl的枪小心吸去乙醇（注意不要吸到管底的RNA），然后开盖晾干乙醇即
可。
这样做后，比只用乙醇洗一次的效果要好很多，我们所提RNA用nanodrop测得260/230
值均在2.0左右。

注意倒掉乙醇后再离心一次，把沾在管壁的乙醇离下来
第三步很重要
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6楼2016-04-11 19:37:56
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普通回帖

18726912610

木虫 (小有名气)
最后的RNA沉淀是什么颜色？也可能有些化学物质的残留

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2楼2016-04-10 23:27:52
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:45:26
可能是样品中盐离子等物质过多，可以用乙醇沉淀后，70%乙醇洗涤一次，再重新溶解。
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3楼2016-04-11 00:03:01
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yy001519

银虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:45:43
230测的是盐浓度，做定量PCR的话要看你RNA的纯度和浓度，以及反转试剂盒的效率，一般浓度在500ng以上，纯度在1.7~2之间都没啥问题的。

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4楼2016-04-11 00:12:28
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:45:58
盐污染或者你试剂盒中提取液的残留，用70%乙醇多洗一遍。晾干再回溶。
一般穗后续影响不大。
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5楼2016-04-11 08:43:22
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sandycool

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:46:28
盐分等杂质太多，我是用了三次75%乙醇进行洗涤的，你可以试试。

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7楼2016-04-11 21:09:41
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sxxzwtx

新虫 (初入文坛)
不影响

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8楼2016-04-11 21:34:11
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fox19931109

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:46:41
260/230太小是因为盐浓度高吧，可以再用75乙醇洗一次，然后用水溶解

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9楼2016-04-11 21:38:37
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一片丹心666

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18726912610 at 2016-04-10 23:27:52
最后的RNA沉淀是什么颜色？也可能有些化学物质的残留

还挺澄清的，略微有点发黄

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10楼2016-04-12 23:43:16
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