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一片丹心666

新虫 (初入文坛)

[求助] 大神们,求助RNA提取260/230低的问题。 已有6人参与

用艾德莱的试剂盒提取植物组织RNA,260/280正常,可就是260/230比值太低,几乎都小于1。跑胶条带也正常,28s比18s亮。之前提的一直正常,不知这两次是怎么回事。请教各位这样的RNA还能用吗?我后期要反转为cDNA做荧光定量,这样会不会影响ct值和标准曲线啊。急急急,求建议。

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sandycool

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:46:28
盐分等杂质太多,我是用了三次75%乙醇进行洗涤的,你可以试试。

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7楼2016-04-11 21:09:41
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18726912610

木虫 (小有名气)

最后的RNA沉淀是什么颜色?也可能有些化学物质的残留

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2楼2016-04-10 23:27:52
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:45:26
可能是样品中盐离子等物质过多,可以用乙醇沉淀后,70%乙醇洗涤一次,再重新溶解。
3楼2016-04-11 00:03:01
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yy001519

银虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-13 09:45:43
230测的是盐浓度,做定量PCR的话要看你RNA的纯度和浓度,以及反转试剂盒的效率,一般浓度在500ng以上,纯度在1.7~2之间都没啥问题的。

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4楼2016-04-11 00:12:28
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