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xiaojiang

新虫 (小有名气)

[求助] 目的基因遗传转化

我的目的片段大约1800bp,用的是PMD19载体(大概250bp),连接之后,做转化到大肠杆菌感受态里,挑菌检测结果如图,maker2000,由图可知转进去的大概只有1000bp,大部分都是这样,如果转成功了,应该是在2000bp条带以上的才对的,但是就算没转成功,但出现1000bp的这么多菌落又是怎么回事?做了很多次都是跑菌检测还是那样的结果,也拿过去测序,结果是空载,现在卡在这里了,请各位大神指点,感激不尽!

目的基因遗传转化


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maixiaodaou

新虫 (小有名气)

那个载体怎么可能250bp,可能连接转化就出了问题,导致没有阳性的单菌落

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2楼2016-04-01 22:52:37
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ENDEAVORCD

铜虫 (初入文坛)

检测的引物确认一下,是否带有接头,带接头可能没有重组上也能扩出条带的哦……

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3楼2016-04-01 23:00:19
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xiaojiang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-04-01 22:52:37
那个载体怎么可能250bp,可能连接转化就出了问题,导致没有阳性的单菌落

我问过师兄师姐,他们说那个载体是只有那么多吧,我也没去特地查一下,难道这也有问题

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4楼2016-04-02 18:39:01
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xiaojiang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ENDEAVORCD at 2016-04-01 23:00:19
检测的引物确认一下,是否带有接头,带接头可能没有重组上也能扩出条带的哦……

原来这也存在问题呀,我用的是这个载体的通用引物,也不知道是否有接头什么的,还是一个初学者,很多都不太会,我得问问我们课题组负责合成这引物是否有接头才行,感谢!

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5楼2016-04-02 18:42:30
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xiaojiang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-04-01 22:52:37
那个载体怎么可能250bp,可能连接转化就出了问题,导致没有阳性的单菌落

那是多大片段呀?

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6楼2016-04-02 18:43:38
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