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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 目的基因遗传转化
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xiaojiang

新虫 (小有名气)

[求助] 目的基因遗传转化

我的目的片段大约1800bp，用的是PMD19载体（大概250bp），连接之后，做转化到大肠杆菌感受态里，挑菌检测结果如图，maker2000，由图可知转进去的大概只有1000bp,大部分都是这样，如果转成功了，应该是在2000bp条带以上的才对的，但是就算没转成功，但出现1000bp的这么多菌落又是怎么回事？做了很多次都是跑菌检测还是那样的结果，也拿过去测序，结果是空载，现在卡在这里了，请各位大神指点，感激不尽！

目的基因遗传转化


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1楼 2016-04-01 16:20:43
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
那个载体怎么可能250bp，可能连接转化就出了问题，导致没有阳性的单菌落

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2楼2016-04-01 22:52:37
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ENDEAVORCD

铜虫 (初入文坛)
检测的引物确认一下，是否带有接头，带接头可能没有重组上也能扩出条带的哦……

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3楼2016-04-01 23:00:19
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xiaojiang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-04-01 22:52:37
那个载体怎么可能250bp，可能连接转化就出了问题，导致没有阳性的单菌落

我问过师兄师姐，他们说那个载体是只有那么多吧，我也没去特地查一下，难道这也有问题

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4楼2016-04-02 18:39:01
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xiaojiang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ENDEAVORCD at 2016-04-01 23:00:19
检测的引物确认一下，是否带有接头，带接头可能没有重组上也能扩出条带的哦……

原来这也存在问题呀，我用的是这个载体的通用引物，也不知道是否有接头什么的，还是一个初学者，很多都不太会，我得问问我们课题组负责合成这引物是否有接头才行，感谢！

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5楼2016-04-02 18:42:30
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xiaojiang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-04-01 22:52:37
那个载体怎么可能250bp，可能连接转化就出了问题，导致没有阳性的单菌落

那是多大片段呀？

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6楼2016-04-02 18:43:38
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