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急，双酶切切T载体和目的片段，结果目的片段切出来几乎看不到条带，怎么回事 已有2人参与
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用的是SacI+SmaI两个酶，单酶切试过了，酶没有问题，但是双酶切切出的T载骨架亮度正常，而我的目的条带几乎看不见，大小在800bp左右，怎么回事？我是想把我这个目的片段从T载体上切下来再克隆到其他载体上，除了先把母的片段连到T载体再从T载体上切下来，还有什么比较好的成功率比较高的方法吗？现在外面载体合成价格怎么算？ FA587493FBDE6721F8F377BA87219F75.jpg |
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2楼2016-03-30 09:37:39
3楼2016-03-30 09:50:04
可是我的载体片段序列不知道 4楼2016-03-30 09:58:05
原海亮
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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首先，你这个T载体连接基因的克隆，验证是正确的么？会不会本身就没有连接上目的条带呢？其次，你的图确实质量不高，对焦不准确，看不大清楚，是有目的条带，但是浓度不高？还是压根就没有目的条带？最后，如果想用其他方法，那就直接pcr扩增出来后，酶切直接连接你的载体，跳过T载体这一步，祝好。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-03-30 12:29:54
6楼2016-03-30 13:58:17
jukongka
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7楼2016-03-31 08:13:06
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8楼2016-03-31 10:38:15
9楼2016-04-01 18:50:10
原来，是这样
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10楼2016-04-02 23:08:35
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