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小小八八

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急,双酶切切T载体和目的片段,结果目的片段切出来几乎看不到条带,怎么回事 已有2人参与

用的是SacI+SmaI两个酶,单酶切试过了,酶没有问题,但是双酶切切出的T载骨架亮度正常,而我的目的条带几乎看不见,大小在800bp左右,怎么回事?我是想把我这个目的片段从T载体上切下来再克隆到其他载体上,除了先把母的片段连到T载体再从T载体上切下来,还有什么比较好的成功率比较高的方法吗?现在外面载体合成价格怎么算?

急,双酶切切T载体和目的片段,结果目的片段切出来几乎看不到条带,怎么回事
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

DNA LADDER没标大小,如果下边弱带是目的基因片段的话,这个亮度可以回收,多切些载体,多切两个胶会好些

发自小木虫Android客户端
7楼2016-03-31 08:13:06
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sihaiming

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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小小八八: 金币+2 2016-03-30 09:50:11
你可以不用连到T载上,太麻烦,直接用一步克隆法,将基因片段P出来,按照试剂盒说明书,直接连到表达载体上。片段不用切,只需切你的载体就可以连接了。简单,效率高。一步克隆试剂盒很多公司可以买,你网上查查
2楼2016-03-30 09:37:39
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小小八八

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sihaiming at 2016-03-30 09:37:39
你可以不用连到T载上,太麻烦,直接用一步克隆法,将基因片段P出来,按照试剂盒说明书,直接连到表达载体上。片段不用切,只需切你的载体就可以连接了。简单,效率高。一步克隆试剂盒很多公司可以买,你网上查查

嗯,谢谢,那p出来的基因都不用进行酶切,切胶回收再连接了吗?
3楼2016-03-30 09:50:04
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小小八八

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sihaiming at 2016-03-30 09:37:39
你可以不用连到T载上,太麻烦,直接用一步克隆法,将基因片段P出来,按照试剂盒说明书,直接连到表达载体上。片段不用切,只需切你的载体就可以连接了。简单,效率高。一步克隆试剂盒很多公司可以买,你网上查查

可是我的载体片段序列不知道
4楼2016-03-30 09:58:05
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