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小小八八

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 急，双酶切切T载体和目的片段，结果目的片段切出来几乎看不到条带，怎么回事已有2人参与

用的是SacI+SmaI两个酶，单酶切试过了，酶没有问题，但是双酶切切出的T载骨架亮度正常，而我的目的条带几乎看不见，大小在800bp左右，怎么回事？我是想把我这个目的片段从T载体上切下来再克隆到其他载体上，除了先把母的片段连到T载体再从T载体上切下来，还有什么比较好的成功率比较高的方法吗？现在外面载体合成价格怎么算？

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1楼 2016-03-30 09:30:53

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原来，是这样

金虫 (小有名气)

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你这个t载体完全是空载啊，才两千多，t载体有很多种，大概都在两千七左右，和你电泳结果差不多。你重新做一下TA克隆，然后做转化蓝白斑筛选再提质粒酶切。

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10楼2016-04-02 23:08:35

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sihaiming

铜虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小小八八: 金币+2 2016-03-30 09:50:11

你可以不用连到T载上，太麻烦，直接用一步克隆法，将基因片段P出来，按照试剂盒说明书，直接连到表达载体上。片段不用切，只需切你的载体就可以连接了。简单，效率高。一步克隆试剂盒很多公司可以买，你网上查查

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2楼2016-03-30 09:37:39

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小小八八

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by sihaiming at 2016-03-30 09:37:39
你可以不用连到T载上，太麻烦，直接用一步克隆法，将基因片段P出来，按照试剂盒说明书，直接连到表达载体上。片段不用切，只需切你的载体就可以连接了。简单，效率高。一步克隆试剂盒很多公司可以买，你网上查查

嗯，谢谢，那p出来的基因都不用进行酶切，切胶回收再连接了吗？

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3楼2016-03-30 09:50:04

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