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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 双酶切切不出来目的条带。。。已有5人参与

用公司返还的 目的基因的 质粒,双酶切(BamH1和EcoR1)切了三个小时,都是一两千的条带,没有我的目的条带。是怎么回事?
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原海亮

木虫 (著名写手)

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返还的质粒是帮你构建的么?信息你有么,包括目的基因大小,酶切位点等

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-25 20:45:24
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果质粒正确的话。可以把质粒转化到DH5a等其他菌中,然后挑选克隆、提质粒、酶切鉴定。因为公司给你的质粒,纯度可能不高。也是会影响酶切的。
3楼2016-03-25 22:36:20
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d532886741

新虫 (初入文坛)

4楼2016-03-26 09:54:09
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-25 20:45:24
返还的质粒是帮你构建的么?信息你有么,包括目的基因大小,酶切位点等

双酶切(BamH1和EcoR1)切了三个小时,都是一两千的条带,没有我的目的条带。
补充:3个小时,会不会产生了非特异酶切,就是除了BamH1和EcoR1特异序列切开了,还切开了别的地方?
5楼2016-03-26 17:26:58
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kwkw

木虫 (著名写手)

建议看一下你的测序结果,找一下序列上酶切位点的位置对不对,这两个酶三个小时一般没问题。

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再苦:也别忘记坚持!再烦:也别忘记微笑!再急:也要注意语气!再累:也要爱自己!低调做人,你会一次比一次稳健。高调做事,你会一次比一次优秀!
6楼2016-03-26 18:38:58
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by kwkw at 2016-03-26 18:38:58
建议看一下你的测序结果,找一下序列上酶切位点的位置对不对,这两个酶三个小时一般没问题。

对的,跟我设计的一摸一样。我的pet32a也切出来了,就是目的基因,难道是公司返还的质粒不好么?我现在在用pcr切角产物重新双酶切试试
7楼2016-03-27 10:51:46
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-25 20:45:24
返还的质粒是帮你构建的么?信息你有么,包括目的基因大小,酶切位点等

就是我做克隆去测序之后,公司返还我的质粒
8楼2016-03-27 10:52:48
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-03-25 22:36:20
如果质粒正确的话。可以把质粒转化到DH5a等其他菌中,然后挑选克隆、提质粒、酶切鉴定。因为公司给你的质粒,纯度可能不高。也是会影响酶切的。

嗯,我用PCR切胶回收的产物,做个双酶切可以么?我准备试试
9楼2016-03-27 10:54:01
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2016-03-27 10:54:01
嗯,我用PCR切胶回收的产物,做个双酶切可以么?我准备试试...

PCR产物切胶回收目的条带,再酶切、电泳回收目的条带、连接是可以的。
10楼2016-03-27 14:28:38
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