| 查看: 2701 | 回复: 11 | ||
[求助]
CDS序列扩增条带暗，求解，急！急！急！！ 已有2人参与
|
||
|
最近在做基因表达，扩CDS全长, 片段900左右，从CDS序列头尾上设计的引物，用基因组不保险，所以用的Q5高保真酶扩的cDNA，但条带一直都一直不是很亮，RNA反转录成cDNA这一步没问题，都测过浓度的，并且cDNA稀释了50倍扩的。后面要做片段融合，试过切胶回收，PCR产物直接回收浓度都非常低，没法做下一步，怎么破？CDS的GC含量不高，51%，引物Tm值相差大概3度，GC没问题，见下图左边较暗的4条带 1.确定cDNA没问题 2.酶没问题 3.引物的话，是头尾确定的吧 如果是体系的话，退火温度已经调到很低了，从65,63,60都试过，条带也不亮，切胶基本没有，AXYGEN、QUIGEN的都用过，不纯化吧，对后续实验可能会有影响，有人碰到类似的情况吗？？  P60321-222820.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有238人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
zhijiangli
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1262.2
- 散金: 683
- 红花: 1
- 帖子: 812
- 在线: 196.4小时
- 虫号: 283726
- 注册: 2006-10-08
- 性别: GG
- 专业: 作物杂种优势及其利用
6楼2016-03-23 13:10:19
2楼2016-03-23 11:31:04
zhijiangli
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1262.2
- 散金: 683
- 红花: 1
- 帖子: 812
- 在线: 196.4小时
- 虫号: 283726
- 注册: 2006-10-08
- 性别: GG
- 专业: 作物杂种优势及其利用
3楼2016-03-23 11:38:14
4楼2016-03-23 12:56:09
5楼2016-03-23 12:57:28
mlxmiao
木虫 (著名写手)
- 应助: 46 (小学生)
- 金币: 7174.3
- 散金: 4871
- 红花: 15
- 帖子: 2883
- 在线: 311.8小时
- 虫号: 127413
- 注册: 2005-12-08
- 专业: 园艺学与植物营养学
7楼2016-03-24 18:49:32
maixiaodaou
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 172.7
- 帖子: 79
- 在线: 9.8小时
- 虫号: 4042700
- 注册: 2015-08-29
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
8楼2016-03-25 00:30:09
9楼2016-03-25 17:34:07
10楼2016-03-25 18:36:56
