| 查看: 2994 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
CDS序列扩增条带暗，求解，急！急！急！！ 已有2人参与
|
||
|
最近在做基因表达，扩CDS全长, 片段900左右，从CDS序列头尾上设计的引物，用基因组不保险，所以用的Q5高保真酶扩的cDNA，但条带一直都一直不是很亮，RNA反转录成cDNA这一步没问题，都测过浓度的，并且cDNA稀释了50倍扩的。后面要做片段融合，试过切胶回收，PCR产物直接回收浓度都非常低，没法做下一步，怎么破？CDS的GC含量不高，51%，引物Tm值相差大概3度，GC没问题，见下图左边较暗的4条带 1.确定cDNA没问题 2.酶没问题 3.引物的话，是头尾确定的吧 如果是体系的话，退火温度已经调到很低了，从65,63,60都试过，条带也不亮，切胶基本没有，AXYGEN、QUIGEN的都用过，不纯化吧，对后续实验可能会有影响，有人碰到类似的情况吗？？  P60321-222820.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有71人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
zhijiangli
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1262.2
- 散金: 683
- 红花: 1
- 帖子: 812
- 在线: 196.4小时
- 虫号: 283726
- 注册: 2006-10-08
- 性别: GG
- 专业: 作物杂种优势及其利用
6楼2016-03-23 13:10:19
2楼2016-03-23 11:31:04
zhijiangli
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1262.2
- 散金: 683
- 红花: 1
- 帖子: 812
- 在线: 196.4小时
- 虫号: 283726
- 注册: 2006-10-08
- 性别: GG
- 专业: 作物杂种优势及其利用
3楼2016-03-23 11:38:14
4楼2016-03-23 12:56:09
