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温柔一刀刀

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】帮忙看一下文献中这个real time PCR结果，弄糊涂了 已有2人参与

第一个问题：图中纵坐标的△ct，是说明△ct公式还是说纵坐标的值就是△ct呢？
另外，如果△Ct是正值，说明目的基因原始拷贝数低于内参基因，△CT越大，说明目的基因mRNA表达越低啊，
图注中为什么说是更高呢？
糊涂了
第二个问题：如果是临床组织标本做相对定量，最终看有没有统计学意义，是不是应该算出每例标本中目的基因的2~-△△CT或是2~-△ct，然后进行统计分析啊，还是直接用△CT做统计分析?
高手们帮忙看看，多谢啦！

【求助】帮忙看一下文献中这个real time PCR结果，弄糊涂了
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雄关漫道真如铁~
1楼 2016-03-22 18:43:07
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

嗯......................
    比内参，你可以当成绝对表达量（虽然和绝对定量没关系），只是校正样品间差异，这时的结果是相对于内参基因的表达量。
    第二个deltaCT比不同样品间同一基因的表达变化，就是把目标（被减去)样品中该基因校正为1，其他样品中同一基因是它的相对表达量。
   一般，做处理的实验一般以这种形式表达。目标样品就是Control组，对比样品就是实验组。第一步，校正样品间差异（就是比内参)，第二布，进行样品间，同一基因比较。
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Let God do with it as He wills
9楼2016-03-26 14:19:16
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
温柔一刀刀: 金币+2, ★有帮助, 没有最终解决问题，但希望继续和您探讨一下，呵呵 2016-03-23 18:45:14
LZ你再仔细看看这张图，写的很清楚啊
△Ct是正值，说明目的基因原始拷贝数高于内参基因，目的CT-内参CT，CT值越大，含量越低，这个不理解？
一个20循环起峰，一个25循环起峰，哪个量多？当然是20的那个。
相对定量2~-△△CT没问题，这个柱状图有的话更好
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有你真好
2楼2016-03-23 13:20:27
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温柔一刀刀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a314919473 at 2016-03-23 13:20:27
LZ你再仔细看看这张图，写的很清楚啊
△Ct是正值，说明目的基因原始拷贝数高于内参基因，目的CT-内参CT，CT值越大，含量越低，这个不理解？
一个20循环起峰，一个25循环起峰，哪个量多？当然是20的那个。
相对定 ...

Ct值是底物到达阈值需要的循环数啊，
照您所说，
比如A 20个循环起峰，CT值即为 20
      B  25个循环起峰，CT值即为25
    照此来看，A的量多，因为A到达阈值需要的循环数要少
那么△ct=（CT_A  -  CT_B）= -5
这个柱状图还是没看懂
anyway ，thank u，希望能继续探讨
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雄关漫道真如铁~
3楼2016-03-23 18:43:28
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 温柔一刀刀 at 2016-03-23 18:43:28
Ct值是底物到达阈值需要的循环数啊，
照您所说，
比如A 20个循环起峰，CT值即为 20
      B  25个循环起峰，CT值即为25
    照此来看，A的量多，因为A到达阈值需要的循环数要少
那么△ct=（CT_A  -  CT_B）=  ...

那么△ct=（CT_A  -  CT_B）= -5 ，错的
反了，人家图上有标注的，是目的基因-内参基因
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有你真好
4楼2016-03-24 09:28:46
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