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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 【求助】帮忙看一下文献中这个real time PCR结果，弄糊涂了
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温柔一刀刀

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】帮忙看一下文献中这个real time PCR结果，弄糊涂了 已有2人参与

第一个问题：图中纵坐标的△ct，是说明△ct公式还是说纵坐标的值就是△ct呢？
另外，如果△Ct是正值，说明目的基因原始拷贝数低于内参基因，△CT越大，说明目的基因mRNA表达越低啊，
图注中为什么说是更高呢？
糊涂了
第二个问题：如果是临床组织标本做相对定量，最终看有没有统计学意义，是不是应该算出每例标本中目的基因的2~-△△CT或是2~-△ct，然后进行统计分析啊，还是直接用△CT做统计分析?
高手们帮忙看看，多谢啦！

【求助】帮忙看一下文献中这个real time PCR结果，弄糊涂了
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雄关漫道真如铁~
1楼 2016-03-22 18:43:07
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温柔一刀刀

新虫 (初入文坛)
假设高级别胶质瘤组中目的基因CT值为28
      低级别胶质瘤组中目的基因CT值为18
归一化都减去内参基因的CT值，假定为15
那么：高级别组 △CT= 28-15=13
         低级别组 △CT= 18-15=3
只能说明目的基因的相对表达量在高级别胶质瘤组中较内参基因相差的更多，在归一化使用同一内参的时候，提示高级别组目的基因的相对表达量低于低级别组。

因为自己也要做论文分析数据，网上查了好多相对定量的帖子，看到这个真是糊涂了，如果文献中用△ct分析的有道理，我也准备这么用了，毕竟有据可查。
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雄关漫道真如铁~
6楼2016-03-24 12:50:24
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
温柔一刀刀: 金币+2, ★有帮助, 没有最终解决问题，但希望继续和您探讨一下，呵呵 2016-03-23 18:45:14
LZ你再仔细看看这张图，写的很清楚啊
△Ct是正值，说明目的基因原始拷贝数高于内参基因，目的CT-内参CT，CT值越大，含量越低，这个不理解？
一个20循环起峰，一个25循环起峰，哪个量多？当然是20的那个。
相对定量2~-△△CT没问题，这个柱状图有的话更好
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有你真好
2楼2016-03-23 13:20:27
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温柔一刀刀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a314919473 at 2016-03-23 13:20:27
LZ你再仔细看看这张图，写的很清楚啊
△Ct是正值，说明目的基因原始拷贝数高于内参基因，目的CT-内参CT，CT值越大，含量越低，这个不理解？
一个20循环起峰，一个25循环起峰，哪个量多？当然是20的那个。
相对定 ...

Ct值是底物到达阈值需要的循环数啊，
照您所说，
比如A 20个循环起峰，CT值即为 20
      B  25个循环起峰，CT值即为25
    照此来看，A的量多，因为A到达阈值需要的循环数要少
那么△ct=（CT_A  -  CT_B）= -5
这个柱状图还是没看懂
anyway ，thank u，希望能继续探讨
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雄关漫道真如铁~
3楼2016-03-23 18:43:28
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 温柔一刀刀 at 2016-03-23 18:43:28
Ct值是底物到达阈值需要的循环数啊，
照您所说，
比如A 20个循环起峰，CT值即为 20
      B  25个循环起峰，CT值即为25
    照此来看，A的量多，因为A到达阈值需要的循环数要少
那么△ct=（CT_A  -  CT_B）=  ...

那么△ct=（CT_A  -  CT_B）= -5 ，错的
反了，人家图上有标注的，是目的基因-内参基因
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有你真好
4楼2016-03-24 09:28:46
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