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日落沙发

新虫 (小有名气)

[求助] iptg诱导大肠杆菌表达 已有2人参与

我做了重组质粒,一个蛋白和荧光蛋白的结合,然后转导到大肠杆菌中。
用iptg诱导载体质粒表达,蛋白和荧光蛋白结合的产物。
但现在出现了大肠杆菌不游动的情况。
经过一些实验验证,发现加入iptg的时候,od的值对结果有一定影响。
但是还是没有达到想要的结果,游动虽然有,但还是不正常。
想问iptg诱导,诱导的时间点和温度对细菌表达可溶性蛋白的产物有多大影响?
求各位大神解答~

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nyjznj2010

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 日落沙发 at 2016-03-17 17:55:12
我的目的并不是提取蛋白质,大肠杆菌是我的研究对象,我是要融合蛋白在大肠杆菌中表达并且不会影响大肠杆菌的基本性质。
现在的情况是,我观察到了大肠杆菌不游,确认如果在od较大时,加入iptg,大肠杆菌不游的情况 ...

IPTG作为乳糖操纵子的诱导物,都是负调控机理,具体的,你可以参考下iptg的诱导机制。不过,我想对数期,菌体的比生长率还是很高的,要想融合蛋白表达,一般都是在对数后期开始诱导,这个时间点积累了大量菌体,诱导后,表达量也高!至于你说的你的目的不是提取蛋白,只是为了研究融合蛋白表达是否影响大肠杆菌的基本性质,这个我倒是还没接触过。不过看你专业是生物化学与分子,我觉得你可以参考下IPTG的诱导机制,再尝试试验。呵呵

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7楼2016-03-18 10:56:10
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日落沙发

新虫 (小有名气)

2楼2016-03-17 13:43:14
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日落沙发

新虫 (小有名气)

3楼2016-03-17 16:59:00
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nyjznj2010

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般不都是在对数生长后期开始诱导的嘛!你可以试试确定一下你这个菌种的生长曲线,一般重组大肠都可以用LB培养基培养的,37℃摇床培养的话,每一个小时取一下样,测个OD值,直到OD不再变化,这个时间点前后就可以加入IPTG诱导了。还有就是每次的接种量不同的话,达到对数生长后期的时间也不一样咧!如果是37摄氏度发酵罐培养的,经验上一般接种后4个小时左右就可以诱导了。看你的培养条件了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2016-03-17 17:11:20
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