24小时热门版块排行榜    

查看: 1363  |  回复: 6

丫头珠

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR问题 已有1人参与

我做荧光定量PCR的时候,选用18S作为内参,结果显示CT值小于10,而其他基因CT值都是20-30,师兄说模板浓度过高,让我做一个梯度找到合适的浓度,我不明白的地方是模板稀释之后,虽然内参的CT值达到了正常范围,但是其他基因的CT值会不会减小好多,我很疑惑!求助各位大神帮忙。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做定量时候,内参基因的Ct值要在一个合理范围内,这样做相对定量时才会有可比性和可信度。通常这个范围与所用内参基因的种类和物种有关,具体的可以参考有关文献的使用。18S小于10缺失模板浓度太高,我们做玉米用18S是通常18左右,其他基因Ct值虽然会增大,但是不超过35一般没有什么问题,毕竟是目的基因/内参基因。
2楼2016-03-15 11:15:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyy9918

银虫 (初入文坛)

稀释后目的基因的Ct肯定会减小的。模板做个梯度稀释,做个标曲算下引物的扩增效率,这样也可以选择下稀释的倍数,让内参和目的基因的Ct值都在合适的范围内。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-03-15 13:17:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头珠

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 11:15:30
做定量时候,内参基因的Ct值要在一个合理范围内,这样做相对定量时才会有可比性和可信度。通常这个范围与所用内参基因的种类和物种有关,具体的可以参考有关文献的使用。18S小于10缺失模板浓度太高,我们做玉米用18 ...

好的,多谢,我试下
4楼2016-03-15 18:18:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头珠

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 11:15:30
做定量时候,内参基因的Ct值要在一个合理范围内,这样做相对定量时才会有可比性和可信度。通常这个范围与所用内参基因的种类和物种有关,具体的可以参考有关文献的使用。18S小于10缺失模板浓度太高,我们做玉米用18 ...

我做了梯度稀释,但是稀释后目的基因的ct值大于30,内参的ct值也变化不是很大,师兄看了说还是不稀释的好,让我换个内参,可是我找不到更合适的内参
5楼2016-03-17 10:17:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头珠

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wyy9918 at 2016-03-15 13:17:09
稀释后目的基因的Ct肯定会减小的。模板做个梯度稀释,做个标曲算下引物的扩增效率,这样也可以选择下稀释的倍数,让内参和目的基因的Ct值都在合适的范围内。

我做了梯度稀释,可是没有合适的浓度满足内参和目的基因都在合适的范围,怎么办
6楼2016-03-17 10:18:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 丫头珠 at 2016-03-17 10:18:16
我做了梯度稀释,可是没有合适的浓度满足内参和目的基因都在合适的范围,怎么办...

让内参在合适范围内,如果目的基因高于35了。换引物吧
7楼2016-03-17 12:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 丫头珠 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 听说今天filecode变了 +22 布布和一二 2026-08-06 45/2250 2026-08-07 14:14 by 日月天地
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 基金中了 +11 laoda193707 2026-08-06 11/550 2026-08-07 10:54 by TT和NN
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +4 archvillain 2026-08-06 8/400 2026-08-07 08:06 by 带你看大海
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见