应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR问题
71/1返回列表
查看: 1437  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

丫头珠

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR问题 已有1人参与

我做荧光定量PCR的时候，选用18S作为内参，结果显示CT值小于10，而其他基因CT值都是20-30，师兄说模板浓度过高，让我做一个梯度找到合适的浓度，我不明白的地方是模板稀释之后，虽然内参的CT值达到了正常范围，但是其他基因的CT值会不会减小好多，我很疑惑！求助各位大神帮忙。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-15 11:04:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做定量时候，内参基因的Ct值要在一个合理范围内，这样做相对定量时才会有可比性和可信度。通常这个范围与所用内参基因的种类和物种有关，具体的可以参考有关文献的使用。18S小于10缺失模板浓度太高，我们做玉米用18S是通常18左右，其他基因Ct值虽然会增大，但是不超过35一般没有什么问题，毕竟是目的基因/内参基因。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2016-03-15 11:15:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyy9918

银虫 (初入文坛)
稀释后目的基因的Ct肯定会减小的。模板做个梯度稀释，做个标曲算下引物的扩增效率，这样也可以选择下稀释的倍数，让内参和目的基因的Ct值都在合适的范围内。

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2016-03-15 13:17:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头珠

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 11:15:30
做定量时候，内参基因的Ct值要在一个合理范围内，这样做相对定量时才会有可比性和可信度。通常这个范围与所用内参基因的种类和物种有关，具体的可以参考有关文献的使用。18S小于10缺失模板浓度太高，我们做玉米用18 ...

好的，多谢，我试下
回复此楼
4楼2016-03-15 18:18:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头珠

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 11:15:30
做定量时候，内参基因的Ct值要在一个合理范围内，这样做相对定量时才会有可比性和可信度。通常这个范围与所用内参基因的种类和物种有关，具体的可以参考有关文献的使用。18S小于10缺失模板浓度太高，我们做玉米用18 ...

我做了梯度稀释，但是稀释后目的基因的ct值大于30，内参的ct值也变化不是很大，师兄看了说还是不稀释的好，让我换个内参，可是我找不到更合适的内参
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-17 10:17:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头珠

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wyy9918 at 2016-03-15 13:17:09
稀释后目的基因的Ct肯定会减小的。模板做个梯度稀释，做个标曲算下引物的扩增效率，这样也可以选择下稀释的倍数，让内参和目的基因的Ct值都在合适的范围内。

我做了梯度稀释，可是没有合适的浓度满足内参和目的基因都在合适的范围，怎么办
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-17 10:18:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 丫头珠 at 2016-03-17 10:18:16
我做了梯度稀释，可是没有合适的浓度满足内参和目的基因都在合适的范围，怎么办...

让内参在合适范围内，如果目的基因高于35了。换引物吧
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-03-17 12:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 丫头珠 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 申博发邮件 +4 Lmengk 2026-09-15 4/200 2026-09-16 00:05 by 木心想继续深造
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:59 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:50 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:35 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-15 18:11 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:59 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:35 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 16:15 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 15:02 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:14 by VMDqgnlKimtZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:38 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 05:22 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭