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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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丫头珠

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR问题已有1人参与

我做荧光定量PCR的时候,选用18S作为内参,结果显示CT值小于10,而其他基因CT值都是20-30,师兄说模板浓度过高,让我做一个梯度找到合适的浓度,我不明白的地方是模板稀释之后,虽然内参的CT值达到了正常范围,但是其他基因的CT值会不会减小好多,我很疑惑!求助各位大神帮忙。
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丫头珠

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 11:15:30
做定量时候,内参基因的Ct值要在一个合理范围内,这样做相对定量时才会有可比性和可信度。通常这个范围与所用内参基因的种类和物种有关,具体的可以参考有关文献的使用。18S小于10缺失模板浓度太高,我们做玉米用18 ...

好的,多谢,我试下
4楼2016-03-15 18:18:26
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做定量时候,内参基因的Ct值要在一个合理范围内,这样做相对定量时才会有可比性和可信度。通常这个范围与所用内参基因的种类和物种有关,具体的可以参考有关文献的使用。18S小于10缺失模板浓度太高,我们做玉米用18S是通常18左右,其他基因Ct值虽然会增大,但是不超过35一般没有什么问题,毕竟是目的基因/内参基因。
2楼2016-03-15 11:15:30
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wyy9918

银虫 (初入文坛)

稀释后目的基因的Ct肯定会减小的。模板做个梯度稀释,做个标曲算下引物的扩增效率,这样也可以选择下稀释的倍数,让内参和目的基因的Ct值都在合适的范围内。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-03-15 13:17:09
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丫头珠

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 11:15:30
做定量时候,内参基因的Ct值要在一个合理范围内,这样做相对定量时才会有可比性和可信度。通常这个范围与所用内参基因的种类和物种有关,具体的可以参考有关文献的使用。18S小于10缺失模板浓度太高,我们做玉米用18 ...

我做了梯度稀释,但是稀释后目的基因的ct值大于30,内参的ct值也变化不是很大,师兄看了说还是不稀释的好,让我换个内参,可是我找不到更合适的内参
5楼2016-03-17 10:17:01
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