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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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i760912798

木虫 (正式写手)

[交流] 高保真酶扩增产物末端加A 已有3人参与

请问高保真酶扩增产物末端加A具体步骤是什么？
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1楼 2016-03-12 21:01:46
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-14 08:33:06
以pcr回收产物为模板，加入一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP或dNTP72℃，十分钟，然后将加A产物直接用于TA连接

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2楼2016-03-12 21:35:34
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wh-joseph at 2016-03-12 21:35:34
以pcr回收产物为模板，加入一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP或dNTP72℃，十分钟，然后将加A产物直接用于TA连接

高保真酶扩增的pcr产物加A后，还需要纯化吗？如果不纯化dNTP会影响连接吗？

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3楼2016-03-13 07:29:57
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poog502

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有加a试剂盒，便宜

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4楼2016-03-13 08:06:12
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poog502

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by i760912798 at 2016-03-13 07:29:57
高保真酶扩增的pcr产物加A后，还需要纯化吗？如果不纯化dNTP会影响连接吗？
...

无需纯化，直接克隆。

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5楼2016-03-13 08:07:38
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by poog502 at 2016-03-13 08:07:38
无需纯化，直接克隆。
...

我是用普通taq酶mix，与等量的pcr产物混合进行加A，不需要纯化加A产物吗？

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6楼2016-03-13 08:13:31
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tmac8410

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么要加A呢？可以试试clonesmarter 的TOPO blunt end cloning kit

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分子生物学10年工作经验
7楼2016-03-13 08:52:34
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poog502

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by i760912798 at 2016-03-13 08:13:31
我是用普通taq酶mix，与等量的pcr产物混合进行加A，不需要纯化加A产物吗？
...

无需纯化，连接载体后做菌落PCR，挑阳性克隆测序
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8楼2016-03-14 08:32:28
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