应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 高保真酶扩增产物末端加A
81/1返回列表
查看: 3757  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

i760912798

木虫 (正式写手)

[交流] 高保真酶扩增产物末端加A 已有3人参与

请问高保真酶扩增产物末端加A具体步骤是什么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-12 21:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-14 08:33:06
以pcr回收产物为模板，加入一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP或dNTP72℃，十分钟，然后将加A产物直接用于TA连接

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-12 21:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wh-joseph at 2016-03-12 21:35:34
以pcr回收产物为模板，加入一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP或dNTP72℃，十分钟，然后将加A产物直接用于TA连接

高保真酶扩增的pcr产物加A后，还需要纯化吗？如果不纯化dNTP会影响连接吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-13 07:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有加a试剂盒，便宜

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-13 08:06:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by i760912798 at 2016-03-13 07:29:57
高保真酶扩增的pcr产物加A后，还需要纯化吗？如果不纯化dNTP会影响连接吗？
...

无需纯化，直接克隆。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-13 08:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by poog502 at 2016-03-13 08:07:38
无需纯化，直接克隆。
...

我是用普通taq酶mix，与等量的pcr产物混合进行加A，不需要纯化加A产物吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-13 08:13:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tmac8410

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么要加A呢？可以试试clonesmarter 的TOPO blunt end cloning kit

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
分子生物学10年工作经验
7楼2016-03-13 08:52:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by i760912798 at 2016-03-13 08:13:31
我是用普通taq酶mix，与等量的pcr产物混合进行加A，不需要纯化加A产物吗？
...

无需纯化，连接载体后做菌落PCR，挑阳性克隆测序
赞一下 回复此楼
8楼2016-03-14 08:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 i760912798 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭