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小胖芙芙

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助!!短片段(169 bp)PCR扩增,用Takara La Taq酶,不出条带呀。。。。 已有5人参与

小白第一次发帖,各位大神见谅。。。。
以前用普通的2×Taq PCR Mix扩增,它含的酶是Taq DNA Polymerase,扩增条带是169 bp,当时可以出条带,亮度可以。也送测了的,返回结果有的位点是双峰。
因为提的DNA是混合物,现在想做克隆看看混合物的成分,就换成了Takara的La taq,但是不出条带了呀。。。引物没变,PCR条件也没变。。。。
我的条件是这样的:
(1)94℃ 5min
(2)94℃ 30s
(3)51 ℃ 30s
(4)72℃ 45s
(5)(2)-(4)39
(6)72℃ 10min
(7)4℃ forever
求各位大神帮帮忙,看看有没有啥问题啊。。。。
有啥没说到的,各位大神尽管问。。。。。
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小胖芙芙

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-06 09:12:52
不到200的片段用普通酶应该可以拿到正确的序列的,突变率还是比较低的,对于你测序是双峰,不知道你送测的样品是什么?测序结果一点正确的都没有?如果是PCR产物,建议将pcr产物进行胶回收或者过柱纯化后测序,另一 ...

测序结果不是不正确,是大部分是单峰,在几个位点有套峰,我猜测可能是有近缘种,想做克隆看看。

发自小木虫Android客户端
13楼2016-03-06 10:37:15
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查看全部 21 个回答

dragonhmw

铁杆木虫 (正式写手)

不应该啊,溶液体系是什么?

发自小木虫Android客户端
2楼2016-03-06 07:24:03
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fudan671

木虫 (著名写手)

重新摸索条件,怀疑da降解

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-03-06 07:43:36
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yilberg

新虫 (小有名气)

4楼2016-03-06 08:38:41
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