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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助！！短片段（169 bp）PCR扩增，用Takara La Taq酶，不出条带呀。。。。
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小胖芙芙

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助！！短片段（169 bp）PCR扩增，用Takara La Taq酶，不出条带呀。。。。 已有5人参与

小白第一次发帖，各位大神见谅。。。。
以前用普通的2×Taq PCR Mix扩增，它含的酶是Taq DNA Polymerase，扩增条带是169 bp，当时可以出条带，亮度可以。也送测了的，返回结果有的位点是双峰。
因为提的DNA是混合物，现在想做克隆看看混合物的成分，就换成了Takara的La taq，但是不出条带了呀。。。引物没变，PCR条件也没变。。。。
我的条件是这样的：
（1）94℃ 5min
（2）94℃ 30s
（3）51 ℃ 30s
（4）72℃ 45s
（5）（2）-（4）39
（6）72℃ 10min
（7）4℃ forever
求各位大神帮帮忙，看看有没有啥问题啊。。。。
有啥没说到的，各位大神尽管问。。。。。
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1楼 2016-03-06 00:06:02
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小胖芙芙

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-06 09:12:52
不到200的片段用普通酶应该可以拿到正确的序列的，突变率还是比较低的，对于你测序是双峰，不知道你送测的样品是什么？测序结果一点正确的都没有？如果是PCR产物，建议将pcr产物进行胶回收或者过柱纯化后测序，另一 ...

测序结果不是不正确，是大部分是单峰，在几个位点有套峰，我猜测可能是有近缘种，想做克隆看看。

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13楼2016-03-06 10:37:15
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dragonhmw

铁杆木虫 (正式写手)
不应该啊，溶液体系是什么？

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2楼2016-03-06 07:24:03
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fudan671

木虫 (著名写手)
重新摸索条件，怀疑da降解

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3楼2016-03-06 07:43:36
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yilberg

新虫 (小有名气)
循环降数一下试试

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4楼2016-03-06 08:38:41
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