| 查看: 4314 | 回复: 20 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助！！短片段（169 bp）PCR扩增，用Takara La Taq酶，不出条带呀。。。。 已有5人参与
|
||
 小白第一次发帖，各位大神见谅。。。。以前用普通的2×Taq PCR Mix扩增，它含的酶是Taq DNA Polymerase，扩增条带是169 bp，当时可以出条带，亮度可以。也送测了的，返回结果有的位点是双峰。 因为提的DNA是混合物，现在想做克隆看看混合物的成分，就换成了Takara的La taq，但是不出条带了呀。。。引物没变，PCR条件也没变。。。。 我的条件是这样的： （1）94℃ 5min （2）94℃ 30s （3）51 ℃ 30s （4）72℃ 45s （5）（2）-（4）39 （6）72℃ 10min （7）4℃ forever 求各位大神帮帮忙，看看有没有啥问题啊。。。。   有啥没说到的，各位大神尽管问。。。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有193人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
不到200的片段用普通酶应该可以拿到正确的序列的，突变率还是比较低的，对于你测序是双峰，不知道你送测的样品是什么？测序结果一点正确的都没有？如果是PCR产物，建议将pcr产物进行胶回收或者过柱纯化后测序，另一个办法即将pcr产物连接到T载体测序。另外实验中不同的酶更换后，条件还是要重新摸索的，特别退火温度，因为经常会出现普通酶可以而高保真的酶不行。我不太清楚第二种酶的延伸速度，不到200的片段应该不用那么长延伸时间吧，循环数也适当减少些，祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
小胖芙芙
8楼2016-03-06 09:12:52
dragonhmw
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 10597.7
- 散金: 65
- 红花: 40
- 帖子: 844
- 在线: 351.6小时
- 虫号: 1565043
- 注册: 2012-01-05
- 性别: GG
- 专业: 兽医传染病学
2楼2016-03-06 07:24:03
fudan671
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2149.1
- 散金: 335
- 红花: 7
- 帖子: 1343
- 在线: 45小时
- 虫号: 4075866
- 注册: 2015-09-16
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
3楼2016-03-06 07:43:36
yilberg
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 851.7
- 散金: 61
- 帖子: 71
- 在线: 8.2小时
- 虫号: 3433143
- 注册: 2014-09-22
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2016-03-06 08:38:41
