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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构载体，转T载体出现错误。
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 构载体，转T载体出现错误。 已有2人参与

在构载体的时候，设计引物在目的基因CDS区两端加上酶切位点（KpnI/BamHI），pcr 位置条带也对（1500bp左右)，但是回收纯化转DH5α，挑出的菌做菌落pcr却显示条带<1000bp（条带很亮），提质粒进行酶切也没有切出来，不知道什么原因，也不知道怎么解决。
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1楼 2016-03-03 09:35:02
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yvonne9044

新虫 (正式写手)
我觉得可以测序看看，个人意见

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2楼2016-03-03 13:00:33
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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yangyang1991: 金币+1, ★有帮助 2016-03-05 23:39:25
yangyang1991: 金币+1, ★有帮助 2016-03-05 23:39:38
先确定CDS中间和质粒上没有同样的酶切位点，如果没有多挑克隆看看，应该有你要的克隆
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3楼2016-03-05 09:36:45
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原海亮

木虫 (著名写手)
pcr用的什么酶

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-03-05 09:40:23
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aoluoquan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yangyang1991: 金币+1, ★有帮助 2016-03-05 23:39:52
酶切都酶切出来说明没连上，PCR鉴定时的条带是非特异。

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5楼2016-03-05 13:45:38
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zxx1314521

新虫 (初入文坛)
你好，能分享下关于设计CDS区引物的心得不？还有个问题，之前pcr可以扩增出很亮的条带，再pcr的时候就p出的条带很弱甚至没有了，所有的条件和用品都是一样的，很纠结

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6楼2016-03-17 08:29:43
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