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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 构载体,转T载体出现错误。 已有2人参与

在构载体的时候,设计引物在目的基因CDS区两端加上酶切位点(KpnI/BamHI),pcr 位置条带也对(1500bp左右),但是回收纯化转DH5α,挑出的菌做菌落pcr却显示条带<1000bp(条带很亮),提质粒进行酶切也没有切出来,不知道什么原因,也不知道怎么解决。
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

我觉得可以测序看看,个人意见

发自小木虫Android客户端
2楼2016-03-03 13:00:33
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yangyang1991: 金币+1, 有帮助 2016-03-05 23:39:25
yangyang1991: 金币+1, 有帮助 2016-03-05 23:39:38
先确定CDS中间和质粒上没有同样的酶切位点,如果没有多挑克隆看看,应该有你要的克隆
3楼2016-03-05 09:36:45
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原海亮

木虫 (著名写手)

天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-03-05 09:40:23
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aoluoquan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yangyang1991: 金币+1, 有帮助 2016-03-05 23:39:52
酶切都酶切出来说明没连上,PCR鉴定时的条带是非特异。

发自小木虫Android客户端
5楼2016-03-05 13:45:38
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zxx1314521

新虫 (初入文坛)

你好,能分享下关于设计CDS区引物的心得不?还有个问题,之前pcr可以扩增出很亮的条带,再pcr的时候就p出的条带很弱甚至没有了,所有的条件和用品都是一样的,很纠结

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6楼2016-03-17 08:29:43
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