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柳梢月

金虫 (小有名气)

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[交流] 做WB的结果，为什么会酱紫啊

这是我做westernblot的结果，总共点了4个孔，都是同一个样品，上面一排是目的蛋白，下面一排是内参，不知道条带为什么这么模糊。三张图的曝光时间分别是3分钟，1.5分钟，30秒，从结果看来曝光时间并没有什么影响，请各位有经验的同行指教。

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1楼 2016-02-26 13:22:19

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yanyanyuyu

新虫 (初入文坛)

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★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:08:45

Western出现很深的背景是常见现象，可以通过适当优化Western的条件进行改进。如果出现很深的背景同时看不清楚条带，可以通过适当降低一抗或二抗的浓度，增加洗涤次数或延长洗涤时间，缩短压片时间，选择合适的封闭试剂和洗涤液等进行适当改进。对于特定样品Western的条件通常需要自行进行适当的优化。通常Tubulin、Actin等内参比较容易检测到，对于特定蛋白的检测相对会困难一些，需要进行一些摸索和优化。一般PVDF的正面对胶。