我想把A,B两个基因通过overlappcr方法连在一起，A引物是F1/R1，B引物是F2/R2，且两片段之间有33bp的同源臂。AB都扩增出来回收，现在用overlapPCR出现了非特异型扩增，一开始先不加引物，...

有没有大佬能解答我一个问题，就是我想构建一个稳转载体，然后用来侵染四突，现在我这边就是想双酶切一个现有载体，得到一个带强启动子的载体，然后把目的基因和3×FLAG连起来，再和带强...

我想将五段单独的DNA序列,连成一段完整的DNA序列，可以用overlap-pcr么

最近在扩启动子。普通方法怎么都扩不出，想请教下大家怎么用overlapPcR设计引物去扩启动子。麻烦惹

切胶回收，总是有大于目的片段的杂条带。目的片段1500bp左右，回收前...用于后续overlap，其产物也有大于目的片段的杂条带。求大家指点迷津啊啊啊啊啊啊，孩子要疯了！pcr结果切胶回收后验证

我想把两个基因通过overlappcr方法连在一起，Agene引物是F1/R1，B基因引物是F2/R2，后期构在过表达载体（酶切位点是bamhI和sacI）上，使两基因共同起作用，是不是必须插入linker区或者每个...

最近做pcr，想将ABC三个片段连在一起，现在已经成功的讲AB和BC连在一起，最后一就是将AB和C或者BC和A连在一起。最后跑胶出来的结果最亮的条带总是C或者A的长度，ABC的长度较弱。也试过将ABC...

有一个大约10kb的片段，分成两段，用PCR扩增出来了，且两片段之间有25BP的同源臂，现在用overlapPCR一直扩不出目的片段，出现了非特异型扩增，primer用的还是原来的，一个片段的上游引物，...

最近要合成一个126bp的基因，直接用...已经设计了一对引物，但是后面用的pcr温度，循环数，酶什么的，保存啊一头雾水（研一刚接触这么东西所以）。有可以给我说说后面具体该怎么操作的大神？

想问下各位，图中以质粒为模板，以1和2为引物，其中酶切位点为BamHI.两个引物上都有BamHI.模板上只有一个，请问可以PCR吗，还有质粒需要酶切吗

如下

我分段扩增一个基因的ORF，第一段1400bp...PCR循环退火54℃，72℃延伸2min30s，5个循环。加入全长正反引物各1微升，继续普通pcr，35个循环。跑胶出来在2k以上没有条带，反而1k左右大面积亮带。

mutagenesisbyPCR-drivenoverlapextensioninfo'.2.'][info3]NatureProtocolsinfo'.3.'][info4]2007info'.4.'][info5]NatureProtocols2,924–932(2007)info'.5.'][info6]doi...

PCRvianoveloverlapsequencesinfo'.2.'][info3]InGeneSynthesisMethodsandProtocols,PeccoudJ(ed).Humana:NewYorkinfo'.3.'][info4]2012info'.4.'][info5]97–110info'...

求助大神[发自小木虫android客户端]

[info1]MatthewD.Nelson,DavidH.A.Fitchinfo'.1.'][info2]OverlapExtensionPCR:AnEfficientMethodforTransgeneConstructioninfo'.2.'][info3]MolecularMethodsfor...

首先引物设计，根据引物设计原则设计了两对引物，我要做overlappcr上臂长度：875bpTC2-S1：5'-ACTCTCGAGATAAGCGCCGTAGGGAAATAC-3'?(Tm=57.8)TC2-S25'-...

求讲解！...这次是把mcherry和cbm3的基因一起做overlap然后做了一个梯度pcr但是电泳之后出现了两个条带！请问有大神能帮忙分析一下可能出现的原因吗～该怎么解决呢！谢谢啦！

目的片段是用overlap方法连接5个片段成功了载体是用反向pcr和酶切线性化的然后用overlap方法构建新载体老是出现图中的条带?试过几次。都是这种情况，条带在点样孔附近。不知道咋办了，求...

载体是用反向pcr扩增的用overlap方法构建新载体老是出现图中的条带试过几次。都是这种情况。不知道咋办了，求各位大神帮帮忙biostar2009飞约疯人院wizardfanyoulinglyw

论文名称：ACombinationStrategyforConstructionof...withOverlapExtensionPCRandOne-StepCloning杂志卷号：JournalofMicrobiologyandBiotechnology,2016;26(12):2184–2191

[info1]GangLiinfo'.1.'][info2]GeneSynthesisMethodBasedonOverlapExtensionPCRandDNAWorksPrograminfo'.2.'][info3]SyntheticBiologyinfo'.3.'][info4]09August2013...

想做重叠延伸PCR，overlap，如果两个子片段都是3’末端带A，这样扩出的长片段会不会在3'端这个点会不会多一个碱基。

ProlongedOverlapExtension-PCRwithApplicationtothePreparationofLarge-SizeRandomGeneMutagenesisLibraryinEscherichiacoliinfo'.2.'][info3]MethodsMolBiolinfo'...

目标是把重叠PCR获得的一个3kb的回收片段通过TA克隆连接到T载体上。...是overlap回收的PCR片段有问题吗？还是连接时回收片段和载体的比例有问题？求大神指点/(ㄒoㄒ)/~要毕业好着急~！