应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做完重叠pcr之后电泳出现了非特异性的条带
71/1返回列表
查看: 2128  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

阿森旦

新虫 (初入文坛)

[求助] 做完重叠pcr之后电泳出现了非特异性的条带

求讲解！本科的一个大创项目！其实我也不是很明白！这次是把mcherry和cbm3的基因一起做overlap 然后做了一个梯度pcr 但是电泳之后出现了两个条带！请问有大神能帮忙分析一下可能出现的原因吗～该怎么解决呢！谢谢啦！

做完重叠pcr之后电泳出现了非特异性的条带


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-03-22 23:05:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)
可能是引物特异性不高哦，或者把退火温度加大。我也曾经出现过，将大小对的条带切下来连T载体。测序对了，就不用再overlapping pcr了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-03-22 23:36:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿森旦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2017-03-22 23:36:11
可能是引物特异性不高哦，或者把退火温度加大。我也曾经出现过，将大小对的条带切下来连T载体。测序对了，就不用再overlapping pcr了

哇！谢谢建议！会尝试的！还想请问一下这个温度已经做到70℃了，还要往上做梯度吗？还有这个电泳图条带后都有一条痕迹 这算是拖尾了吗？？？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-03-22 23:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)
退火温度70？是gc含量太高了吧。一般引物退火温度不会这么高啊。你两条引物的退火温度之间相差多少？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-03-23 00:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)
overlapping的重叠序列最好大于15bp。你要实在不行，你试试62度退火。大多数情况下62度就能p出来，尽管引物序列很长

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

阿森旦
5楼2017-03-23 00:05:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半天云

新虫 (初入文坛)
目的条带对切胶回收就可以了
赞一下 回复此楼
6楼2017-03-26 18:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿森旦

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2017-03-23 00:05:48
overlapping的重叠序列最好大于15bp。你要实在不行，你试试62度退火。大多数情况下62度就能p出来，尽管引物序列很长

哇！谢谢你！好久没回来看！都快忘了这个帖了！感恩！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-06-07 22:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 阿森旦 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭