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[求助] 载体和目的片段overlap pcr 总是连不上求助已有2人参与

目的片段是3.6k，载体是6k。
目的片段是用overlap方法连接5个片段成功了
载体是用反向pcr和酶切线性化的
然后用overlap方法构建新载体老是出现图中的条带?
试过几次。都是这种情况，条带在点样孔附近。不知道咋办了，求各位大神帮帮忙

@biostar2009 发自小木虫Android客户端

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1楼 2017-02-28 00:14:52

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小冀-

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-03 21:06:02

第一，你的胶放反了，第二就是在加样孔里的极有可能是蛋白或基因组，提取的时候有问题，第三你是跑的质粒吗，如果是的话可能是没连上，第四，载体为什么要反向pcr，不能直接酶切做overlap吗

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···

2楼2017-02-28 08:35:39

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 小冀- at 2017-02-28 08:35:39
第一，你的胶放反了，第二就是在加样孔里的极有可能是蛋白或基因组，提取的时候有问题，第三你是跑的质粒吗，如果是的话可能是没连上，第四，载体为什么要反向pcr，不能直接酶切做overlap吗

酶切也试过得到的结果是一样的。胶的确是放反了的习惯这样子了。但是单独酶切质粒跑出来也是一样的

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3楼2017-02-28 08:51:44

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