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作者
最后发表
生物科学
单酶切和双酶切的优缺点
1
单酶切单酶切指使用同一种限制性核酸内切酶对载体和目的基因...例如,采用EcoRⅠ与
BamH
Ⅰ双酶切时,载体两端将分别产生EcoRⅠ黏性末端与
BamH
Ⅰ黏性末端,目的基因两端也会对应产生相同的异源...
科研战神来了
2025-10-24 06:10
生物科学
荧光素酶表达的淋巴瘤NCG小鼠模型的构建
淋巴瘤是发生在淋巴结及或淋巴结外...对lentiCRISPRv2进行XbaⅠ和
BamH
Ⅰ双酶切去除cas9表达框,酶切产物进行
1
%琼脂糖胶跑胶回收10000bp处条带,利用Addgene设计引物lentiCRISPRv2-luc+-F(5’-...
YX科研小助理
2024-09-03 05:09
文献求助
钠与盐溶液反应的实验探究
李明毛芳芳张丽霞盛家荣钠与盐溶液反应的实验探究化学教育10.13884/j.1003-3807hxjy....v=b6ffGdm2pWaWO53Xeg6clSnCuYH
1
Uw%25mmd2FGM7%25mmd2
BaMH
%25mmd2FBsZWM4sEYNlj0GcJR
1
T3Sp2Ux
Supercarrier
2021-03-12 01:29
分子生物
bamh1
求助!我得
bamh1
从-20拿出来在室温放了两个小时多忘记放回去了,会不会失效呀
小guoguo
2020-12-05 11:39
生物科学
原核表达谱带偏大20kda是为什么呢?Pet30a
求助大神们,为什么我做的Pet30a-(
BamH1
)EGFP(Ecor1)-(Ecor1)p62(XHO1),转Bl21,没有其他标签了呀,理论大小是97kda,但是每次考染的结果都是120+呢?求解答,已经做了几十次了!金币不多!...
明眸浅笑
2019-12-03 08:58
分子生物
重组酵母表达问题
出发菌株用的GS115(SMD1168、X33等也试过),质粒载体用的pPIC9K,方法是用GAP启动子基因序列将9K上的AOX
1
启动子序列替换掉(从SacⅠ酶切位点开始到
BamH
Ⅰ结束全部替换),延用a-MF信号肽...
云是天空白
2019-11-28 02:08
分子生物
RNAi载体构建
构建RNAi载体,在Xhol和
BamH1
两个酶切位点插入目的基因片段,连接转化后用目的基因片段引物可以pcr扩出相应条带,且测序结果也表明两个片段均已连接成功,但用载体的引物无法pcr扩出目的条...
无畏的
2019-09-21 04:33
分子生物
请问takera的
Bamh1
和Nhe1双酶切时间和温度是多少呢
急求
北冥有鱼
2019-05-03 06:06
硕博家园
PBI 121双酶切
最近也在做PBI121这个载体,遇到很多问题,首先质粒提取浓度低,质粒电泳条带淡,其次,双酶切之后电泳是弥散带,我用的是
Bamh1
,和Xba1这两个酶切位点,用的是NEB家的酶。希望得到大家的...
榕小蜂
2019-03-21 07:15
药学
人溶菌酶的药理作用及在毕赤酵母表达系统中的表达研究
(4)利用BglⅡ和
BamH
Ⅰ属于同尾酶的特点,设计多拷贝串联hLYZ基因表达载体,并获得了两拷贝及四拷贝串联hLYZ基因转化重组子K-2-2、K...5L发酵罐中,K-2-2低细胞密度(~50g-DCW?L-
1
)诱导73h及高...
medicilon
2018-12-18 01:50
硕博家园
急急急,敲除及回复载体构建,请大神指点双酶切问题。
最近在做敲除及回复载体构建,敲除采用的是双酶切连接基因上下游及报告基因的方法,在实验中发现,在连了上游基因片段的基础上,采用Thermo的快切酶Xba1及
BamH1
双酶切载体及下游基因片段,...
六玥膤wf
2018-10-30 01:38
分子生物
纯干货丨大神解答关于无缝克隆技术的常见问题
(
1
)简单、快速、精确、定向克隆,连接过程只需要15分钟;...如图所示(单一片段重组克隆引物设计):GeneofInterest左右两边均为载体序列,以载体分别通过
BamH
Ⅰ、EcoRⅤ和KpnⅠ单酶切为例,...
华联科生物
2018-10-30 08:58
分子生物
用单抗WB检测出两条带,求助!
一个大概31KD的蛋白,通过pet_30a载体做的原核载体表达,酶切位点分别为
BamH1
和xho1。由于还没有制备抗体,所以用his-tag标签抗体检测的,结果在41KD和36KD左右都出现了带。41KD的带更粗些...
太阳虫
2018-10-03 08:07
分子生物
PGEX-4T-
1
载体质粒构建求助,如果成功了重谢!
根据质粒图谱我在目的片段两端设计了两个酶切位点ECOR1和
Bamh1
.PCR扩增后得到带有酶切位点的目的片端和质粒进行双酶切,PCR产物的酶切:PCR产物23μ,ECOR1/
BamH1
,2μ,10*K3μ合计30μ。...
彭彭彭123
2018-07-19 01:43
分子生物
BamH1
和MluI双酶切
最近用
BamH1
和MluI双酶切,都是NEB的HF省时酶,cusmart缓冲液,公司说明书上说这两种酶在cusmart中效率为100%,但是我现在的载体根本切不开,我在网上查的MluI这个酶效率比较低,不加保护...
ZYJLL
2018-07-17 07:24
分子生物
为什么双酶切后测序找不到上游酶切位点?
上游起始密码子前5端加入了
BamH1
的酶切位点,做了菌落PCR后,强阳性,pcr产物测序结果找orf后做blastp,和预期片段比对率98%,目的片段应该是加上去了。但是,一代测序的结果中找不到酶切...
海边闲散人
2018-05-03 09:20
生物科学
构建重组质粒
载体是自杀性质粒,用
BamH1
单酶切后胶回收(酶切效率不高),片段是上下游融合,跑胶鉴定大小并回收。然后按1:2的比例20ul体系连接,可做了好几次都不长。实验室师兄师姐用同样的方法,质粒...
莫说莫说
2018-03-19 01:21
生物科学
32a载体,目的蛋白大小
用32a载体,转BL21,酶切位点为
BamH1
和Not1,我的两个基因大小为19kd和7kd,其中7kd这个没有带终止密码子,19kd的这个带了终止密码子。想问我的目的蛋白大小应该为多少呢?对这一块确实刚刚...
栀子花汪洋
2018-01-05 02:23
分子生物
分子生物学问题
设计两段引物,使其退火后形成的双链DNA序列可以直接与
bamh1
(识别序列为G|GATCC)和hind酶(识别A|AGCTT)双酶切后的psilencer2-1U6连接,构成重组质粒,实现上述目标,请写出两段引物退火...
云中君123
2017-11-23 06:05
分子生物
SOE-PCR 相关问题
首先,本人做细菌基因的缺失,新手一枚。SOE-pcr设计上下臂引物时,在F1和R2加酶切位点。载体为Pksv7.我就是问一个比较蠢得问题,选择酶切位点...我想选择PST1和
BamH1
,谁加在F1?谁在R2?谢谢啦
huan121004
2017-11-01 02:15
分子生物
片段连了半年了,死活连不上,要看再不行就要延期了,求大神帮忙...
直接连接表达载体,这三个片段都属于同一个基因家族,就是同源性不高,片段是pcr得到的(提取的研究材料全RNA反转录得到的cDNA),采用双酶切的方法,选取的是sal1和
BamH1
两个酶切位点,...
感觉要延期哎
2017-09-16 03:49
分子生物
bamh1
和sac1的酶切温度和时间是多少
bamh1
和sac1的双酶切温度和时间是多少
呵呵鹏呵呵
2017-09-01 05:36
分子生物
有没有提高基因组DNA片段和载体连接效率的方法?
基因组用sau3a1切,载体用
bamh1
切并去磷酸化,我的连接效率一直很低,不知为什么。
乔艳明
2017-07-23 03:35
分子生物
刚合的基因双酶切后电泳没有目的片段
找公司合的基因用
BamH1
和Sal1双酶切~电泳没有目的片段~电泳图第一个是质粒~第二个是Sal1单酶切~第三个是
BamH1
单酶切~第三个是双酶切~目的片段1100左右~载体2700左右~一共是3800左右...
Zx1597
2017-07-17 10:52
分子生物
TA克隆连接方向问题,实验室小白,求大神们指教!
我用pMD19Tsimple和带有
BamH1
和Hind3的PCR产物链接,怎么验证它的连接方向呢?我接下来要连接到pET-32a上表达,已经确定用这两个酶切位点可以正向连在pET-32a上了,还需要验证PCR产物在克隆...
linhanmm
2017-06-09 01:46
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