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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PGEX-4T-1载体质粒构建求助，如果成功了重谢！！！
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彭彭彭123

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2018-07-19 21:27:43
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qspyyy

木虫 (职业作家)
体系不对

发自小木虫Android客户端
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喜欢实验。。。不喜欢写文章。。。
2楼2018-07-19 21:47:21
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-20 02:08:52
我建议你去检查一下设计引物的保护碱基，我记得BamH1 的保护碱基好像需要6个，如果保护碱基不够酶切不完全是无法进行连接的
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3楼2018-07-19 22:43:56
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莫落

木虫 (正式写手)
酶加多了，建议每个用1uL

发自小木虫IOS客户端
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4楼2018-07-19 23:31:00
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莫落

木虫 (正式写手)
300的片段很好做的

发自小木虫IOS客户端
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5楼2018-07-19 23:32:11
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 金币+2, 鼓励回复经验交流 2018-07-20 03:47:56
质粒和片段一定要换成摩尔浓度。
摩尔比建议1:5，甚至1:10. 因为相对质粒比较而言，你的插入片段很小
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
6楼2018-07-20 02:21:59
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种构建建议使用 takara的infusion hd kit 不用做pcr产物的双酶切 要方便一点
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7楼2018-07-20 04:06:43
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彭彭彭123

禁虫 (初入文坛)
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8楼2018-07-22 10:33:06
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 彭彭彭123 at 2018-07-22 10:33:06
请问连接的摩尔浓度怎么换算...

首先根据浓度(ng/ul), 得出mass , 也就是多少ng
你知道片段长度，也就是dsDNA的length
放进这个网站，就能算了。http://nebiocalculator.neb.com/#!/dsdnaamt
建议补一下摩尔分子量的基础化学知识，可以说是分子生物学的基石也不为过。所有的问题都要放到这个体系思考。也可能你都知道，这里提醒下
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
9楼2018-07-22 19:41:42
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