如果分别以两段相似序列作为外引物和内引物进行巢式PCR是否能够避免该问题？如下图，但是这样5'和3'RACE产物又无法形成交叠，还请各位老师帮忙看看，指点一二，万分感谢！

最近在做巢式pcr，求助各位大神：1.一次扩增的模板无法定量的条件下，加多少合适？2.一次扩增产物进行产物纯化，可否定量稀释到确定的量再进行二次扩增？3.如果将一次扩增产物进行纯化定量...

SNP：rs1801253PCR测序用普通PCR结果极其不稳定，部分模板扩增不出条带，现计划通过巢式PCR扩增此片段，希望各位过路大神能拔刀相助，帮小弟设计2对巢式引物，感激不敬！

[info1]张灵君info'.1.'][info2]牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定与巢式-PCR诊断方法的建立info'.2.'][info3]山东农业大学info'.3.'][info4]2005info'.4.'][info5]S858.23;S854.4...

求助内容如题，之前看到有相同的问题，我的情况是这样的：阳性对照用的全基因组能稳定的P出目标条带来，但是样品提取DNA后，就会出现这种情况。样品中的阳性样品最开始能够很正常的跑出来...

我用的巢式PCR，第一轮产物目标条带大小1325bp，第二轮是830bp，mark是2000bp，第二轮模板为第一轮产物10倍稀释物，电泳结果如图所示，最亮的条带应该为目标条带，三个阳性对照是不同稀释...

试过十几对引物所有pcr结果都是杂带，巢式pcr也没用，真心怀疑这个基因是否存在，可是该基因的cDNA又是确实有，彻底无奈了，求助大神们有什么好的建议。P.S.根据公布的基因组序列，该基因两...

巢式PCR玩切胶回收，纯化测序，测序结果是这样子的：出来一个100多得片段，经过同源比对，发现这个片段比其他物种的基因片段5‘端少20左右bp，但是在测出的片段中巢式前、后特异性引物都是...

最近接受别人的PCR，是做巢式PCR，无论是第一轮扩增还是第二轮都没有目的条带，只有在100bpMARKER那有类似二聚体的模糊条带。郁闷了，应该是成熟的体系了，以前他们都能做出来，...求助了！...

第一步pcr都是25微升的体系，12.5微升的premix，上下游引物都是0.5微升，模版是2微升。第二步50微升体系premix，上下游引物1微升，模版2微升哪里出问题了，难道是我的操作？师兄做的p出来...

师兄做的p出来的条带很亮很好，为什么我做的阳性对照...两步pcr都是25微升的体系，12.5微升的酶，上下游引物都是0.5微升，模版是2微升。哪里出问题了，难道是我的操作？点样飘出来了还是什么？

巢式PCR，摸条件，直接跑第二次的琼脂糖。用了12个模板，一共扩出来7个，扩出来的效果非常好，条带明亮无杂带，扩增不出来的隐约可见目的条带的影子，高二聚体第一次换了酶，多扩增出来...

求助环境中分析真菌、细菌、放线菌多样性和种群结构时，采用PCR-DGGE分析时的引物，最好是巢式PCR的引物对。拜谢！

新手求助，本人最近在做3‘RACE,是提取mRNA反转录做的，用了巢式PCR、也做了降落的，用了一个多月也没结果，实在郁闷，我有2个问题想请教下各位高手：1.我要做的基因表达的蛋白是膜内侧蛋白...

最近在做3'RACE，巢式PCR的时候总是没有目的产物，可以确定模板没有问题（用其他引物P此模板有目的片段），我做的序列目前还是未知序列，NCBI上没有的，我是通过高通量测序得到的一个片段，...

我用的是巢式PCR，先后用两对引物来扩增，结果跑胶条带很亮。我的问题是：环境样品，肯定会存在里面物种DNA含量差异的问题，如果我的样品中某一物种的DNA量非常少，在经过PCR放大之后，...

用的是clontech的SMARTer，已经设计了三四条引物了，基本上都是弥散，做了两个巢式，也是弥散.RNA的18s要比28s亮些，但是完整性还不错，有没可能是5'...基本上都符合说明书上的要求，PCR体系...