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[交流] 小麦DNA提取

请问大家都是用什么方法提取小麦的DNA的，我用的CTAB法提取的总是浓度很低，请问大家都是怎么提取的，可以交流一下吗。

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1楼 2016-02-24 10:14:51

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引用回帖:

6楼: Originally posted by nannan8666 at 2016-02-24 20:10:47
你试试大量法，小麦研磨要充分，研磨不充分浓度会低，

我用的就是大量提取法，这是我的提取步骤，你看有哪需要改进的地方，
1.取材料0.5g研磨
2.将研磨好的材料放入预冷的10ml管中，加入约4ml的CTAB，于65摄氏度温浴1h，每隔10min颠倒混匀一次。
3.冷却至室温，加等体积的24:1，混匀，12000r/min，15min
4.取上清加等体积的24:1，混匀，12000r/min，15min
5.取上清加等体积的无水乙醇（-20摄氏度）混匀，-20摄氏度放置一小时，12000r/min，10min
6.弃上清，加70%的乙醇，12000r/min，10min，可清洗两次
7.干燥5min，加约100ul双蒸水溶解（约15min），加1%的RNA酶。37摄氏度温浴1h
8.再一次24:1抽提混匀，12000r/min，15min
9.取上清，加2倍体积无水乙醇（-20摄氏度）-20摄氏度放置一小时，12000r/min，10min
10.弃上清，所得DNA用75%乙醇清洗3次，晾干加超纯水50ul，溶解DNA，于-20备用。

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7楼2016-02-25 09:57:14

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nannan8666

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 15836073150 at 2016-02-25 09:57:14
我用的就是大量提取法，这是我的提取步骤，你看有哪需要改进的地方，
1.取材料0.5g研磨
2.将研磨好的材料放入预冷的10ml管中，加入约4ml的CTAB，于65摄氏度温浴1h，每隔10min颠倒混匀一次。
3.冷却至室温，加等 ...

研磨要用液氮，材料用1g试试，用2X的CTAB
1.研磨完的材料加5ml的ctab在65。c水浴，一个小时，期间晃一下
2，水浴后稍冷却离心10000r的10min
3. 提取上清液加入等体积的酚和氯仿（氯仿：异戊醇=24:1）酚和氯仿的体积为1:1
混匀后离心15min
4离心后上清加入等体积的氯仿，摇匀后再离心10min，离心后加入2倍体积的预冷无水乙醇，然后醇沉1h，离心气干。
4，水溶dna，加0.5ml的18.2的水.抽打混匀，去rna，之后抽提！方法如上！最后气干融于50uTE即可

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9楼2016-02-25 11:03:58

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