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15836073150

金虫 (小有名气)

[交流] 小麦DNA提取

请问大家都是用什么方法提取小麦的DNA的，我用的CTAB法提取的总是浓度很低，请问大家都是怎么提取的，可以交流一下吗。
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1楼 2016-02-24 10:14:51
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15836073150

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nannan8666 at 2016-02-24 20:10:47
你试试大量法，小麦研磨要充分，研磨不充分浓度会低，

我用的就是大量提取法，这是我的提取步骤，你看有哪需要改进的地方，
1.取材料0.5g研磨
2.将研磨好的材料放入预冷的10ml管中，加入约4ml的CTAB，于65摄氏度温浴1h，每隔10min颠倒混匀一次。
3.冷却至室温，加等体积的24:1，混匀，12000r/min，15min
4.取上清加等体积的24:1，混匀，12000r/min，15min
5.取上清加等体积的无水乙醇（-20摄氏度）混匀，-20摄氏度放置一小时，12000r/min，10min
6.弃上清，加70%的乙醇，12000r/min，10min，可清洗两次
7.干燥5min，加约100ul双蒸水溶解（约15min），加1%的RNA酶。37摄氏度温浴1h
8.再一次24:1抽提混匀，12000r/min，15min
9.取上清，加2倍体积无水乙醇（-20摄氏度）-20摄氏度放置一小时，12000r/min，10min
10.弃上清，所得DNA用75%乙醇清洗3次，晾干加超纯水50ul，溶解DNA，于-20备用。
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7楼2016-02-25 09:57:14
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nannan8666

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 15836073150 at 2016-02-25 09:57:14
我用的就是大量提取法，这是我的提取步骤，你看有哪需要改进的地方，
1.取材料0.5g研磨
2.将研磨好的材料放入预冷的10ml管中，加入约4ml的CTAB，于65摄氏度温浴1h，每隔10min颠倒混匀一次。
3.冷却至室温，加等 ...

研磨要用液氮，材料用1g试试，用2X的CTAB
1.研磨完的材料加5ml的ctab在65。c水浴，一个小时，期间晃一下
2，水浴后稍冷却离心10000r的10min
3. 提取上清液加入等体积的酚和氯仿（氯仿：异戊醇=24:1）酚和氯仿的体积为1:1
混匀后离心15min
4离心后上清加入等体积的氯仿，摇匀后再离心10min，离心后加入2倍体积的预冷无水乙醇，然后醇沉1h，离心气干。
4，水溶dna，加0.5ml的18.2的水.抽打混匀，去rna，之后抽提！方法如上！最后气干融于50uTE即可

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9楼2016-02-25 11:03:58
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普通回帖

niuminjie

新虫 (初入文坛)
★
15836073150(金币+1): 谢谢参与
我们也是CTAB法，感觉浓度还可以呢

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2楼2016-02-24 13:54:27
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xiaoding095

新虫 (初入文坛)
★
15836073150(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by niuminjie at 2016-02-24 13:54:27
我们也是CTAB法，感觉浓度还可以呢

你用的是试剂盒？

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3楼2016-02-24 14:20:34
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niuminjie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoding095 at 2016-02-24 14:20:34
你用的是试剂盒？
...

不是试剂盒，我们提的小麦叶片基因组DNA，附CTAB配方，提取步骤应该都差不多，网上都有哈！
小麦DNA提取



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4楼2016-02-24 14:25:09
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15836073150

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by niuminjie at 2016-02-24 13:54:27
我们也是CTAB法，感觉浓度还可以呢

这是我的提取步骤，请问还有哪需改进。您的提取步骤可以参考一下吗。
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5楼2016-02-24 16:40:04
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nannan8666

新虫 (正式写手)
★
15836073150(金币+1): 谢谢参与
你试试大量法，小麦研磨要充分，研磨不充分浓度会低，

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6楼2016-02-24 20:10:47
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woshiyuminyu

新虫 (正式写手)
★
15836073150(金币+1): 谢谢参与
ctab

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8楼2016-02-25 10:10:57
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mdx1215

新虫 (初入文坛)
试剂盒吧
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11楼2016-03-22 15:57:39
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yuzhuce10楼
2016-02-26 19:14   回复  
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