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[交流]
小麦DNA提取
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| 请问大家都是用什么方法提取小麦的DNA的，我用的CTAB法提取的总是浓度很低，请问大家都是怎么提取的，可以交流一下吗。 |
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我用的就是大量提取法，这是我的提取步骤，你看有哪需要改进的地方， 1.取材料0.5g研磨 2.将研磨好的材料放入预冷的10ml管中，加入约4ml的CTAB，于65摄氏度温浴1h，每隔10min颠倒混匀一次。 3.冷却至室温，加等体积的24:1，混匀，12000r/min，15min 4.取上清加等体积的24:1，混匀，12000r/min，15min 5.取上清加等体积的无水乙醇（-20摄氏度）混匀，-20摄氏度放置一小时，12000r/min，10min 6.弃上清，加70%的乙醇，12000r/min，10min，可清洗两次 7.干燥5min，加约100ul双蒸水溶解（约15min），加1%的RNA酶。37摄氏度温浴1h 8.再一次24:1抽提混匀，12000r/min，15min 9.取上清，加2倍体积无水乙醇（-20摄氏度）-20摄氏度放置一小时，12000r/min，10min 10.弃上清，所得DNA用75%乙醇清洗3次，晾干加超纯水50ul，溶解DNA，于-20备用。 |
7楼2016-02-25 09:57:14
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研磨要用液氮，材料用1g试试，用2X的CTAB 1.研磨完的材料加5ml的ctab在65。c水浴，一个小时，期间晃一下 2，水浴后稍冷却离心10000r的10min 3. 提取上清液加入等体积的酚和氯仿（氯仿：异戊醇=24:1）酚和氯仿的体积为1:1 混匀后离心15min 4离心后上清加入等体积的氯仿，摇匀后再离心10min，离心后加入2倍体积的预冷无水乙醇，然后醇沉1h，离心气干。 4，水溶dna，加0.5ml的18.2的水.抽打混匀，去rna，之后抽提！方法如上！最后气干融于50uTE即可 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2016-02-25 11:03:58
2楼2016-02-24 13:54:27
3楼2016-02-24 14:20:34
4楼2016-02-24 14:25:09
5楼2016-02-24 16:40:04
6楼2016-02-24 20:10:47
8楼2016-02-25 10:10:57
11楼2016-03-22 15:57:39
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yuzhuce10楼
2016-02-26 19:14
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