应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 假单胞菌 同源重组 插入突变 蔗糖筛选
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1673  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

会飞的鱼622

新虫 (初入文坛)

[求助] 假单胞菌 同源重组 插入突变 蔗糖筛选 已有2人参与

各位大侠请求帮助
我做的是假单胞菌羧卞抗性的基因敲除试验，选用的自杀质粒是PJQ200sk  gent抗性，将基因的ATG上下游500-600bp片段扩增出来，在ATG下游20bp左右插入卡那霉素抗性基因，然后连入PJQ200sk   
1.进行三亲杂交，在卡那霉素和羧卞的平板上长斑，pcr验证能够检测到突变后基因大小的片段，但是扩增不出来假单胞菌其他的基因，蔗糖筛选后也一样
2.进行电转，在卡那霉素和羧卞的平板上长斑，菌液pcr目的基因和其他基因都扩增不到，能再蔗糖板上张，也能在gent抗性的培养基中张
各位大侠帮帮忙

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-02-15 00:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

会飞的鱼622

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by quiller2000 at 2016-02-23 19:00:41
是杂菌吗？

1 是否有gen的抗性？
2 用单抗平板测试你的供体菌，受体菌和辅助菌确实能够用来筛选，而没有其它交叉的抗性
3 关于sacB的问题，在假单胞菌中本来就用的不大好，反正我们的是这样
4 三亲本后，挑取 ...

是说我的双抗筛选后获得的单克隆是否有gent抗性是吗？
我的电转化后得到的转化子是有gent抗性的，三亲结合没试过是否有gent抗性
我做的基因不是致死基因
抗生素交叉抗性的问题，我试过辅助菌和供体菌两种菌不抗羧卞，受体菌不抗kana
麻烦帮我在分析一下可能还是哪些方面的问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-02-26 19:06:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

岳大白

新虫 (初入文坛)
我和你做的差不多，目前是单交换进行的不顺利，也不知道什么原因

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-02-23 15:55:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

岳大白

新虫 (初入文坛)
你的三亲杂交是怎么做的，用没用到辅助质粒，能和我说说吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-02-23 15:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-02-23 22:22:54
是杂菌吗？

1 是否有gen的抗性？
2 用单抗平板测试你的供体菌，受体菌和辅助菌确实能够用来筛选，而没有其它交叉的抗性
3 关于sacB的问题，在假单胞菌中本来就用的不大好，反正我们的是这样
4 三亲本后，挑取的单菌落多划线几次，然后用蔗糖筛选也是多划线几次--- ---别染杂菌了
5 主要看pcr的结果吧  sacB不是太好用，或者你的基因是条件致死了，长出来的都是突变了的，那就搞不定了
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

会飞的鱼622
致良知
4楼2016-02-23 19:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 310求调剂 +3 争取九点睡 2026-03-30 3/150 2026-03-30 07:08 by chixmc
[基金申请] 面上5B能上会吗？ +4 redcom 2026-03-29 4/200 2026-03-29 17:39 by 最爱编纂辞典
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +14 Mr. Z 2026-03-25 14/700 2026-03-29 17:27 by 学员8dgXkO
[考研] 321求调剂 +7 璞玉~~ 2026-03-25 8/400 2026-03-29 06:41 by 544594351
[考研] 315求调剂 +4 akie... 2026-03-28 5/250 2026-03-28 21:05 by zhq0425
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +3 萝卜炖青菜 2026-03-28 3/150 2026-03-28 14:11 by 唐沐儿
[考研] 299求调剂 +7 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 7/350 2026-03-28 13:09 by 唐沐儿
[考研] 085701环境工程求调剂 +9 多久上课 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:58 by fmesaito
[考研] 287求调剂 +10 land xuxu 2026-03-26 10/500 2026-03-27 15:33 by 帕尔马拉特
[考研] 085600材料与化工调剂 +10 A-哆啦Z梦 2026-03-23 16/800 2026-03-27 15:13 by caszguilin
[考研] 085600，材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 机械学硕310分，数一英一，一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭