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假单胞菌 同源重组 插入突变 蔗糖筛选 已有2人参与
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各位大侠请求帮助 我做的是假单胞菌羧卞抗性的基因敲除试验，选用的自杀质粒是PJQ200sk gent抗性，将基因的ATG上下游500-600bp片段扩增出来，在ATG下游20bp左右插入卡那霉素抗性基因，然后连入PJQ200sk 1.进行三亲杂交，在卡那霉素和羧卞的平板上长斑，pcr验证能够检测到突变后基因大小的片段，但是扩增不出来假单胞菌其他的基因，蔗糖筛选后也一样 2.进行电转，在卡那霉素和羧卞的平板上长斑，菌液pcr目的基因和其他基因都扩增不到，能再蔗糖板上张，也能在gent抗性的培养基中张 各位大侠帮帮忙 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2016-02-23 15:56:24
2楼2016-02-23 15:55:32
quiller2000
木虫 (著名写手)
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- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
4楼2016-02-23 19:00:41
送红花一朵 |
是说我的双抗筛选后获得的单克隆是否有gent抗性是吗？ 我的电转化后得到的转化子是有gent抗性的，三亲结合没试过是否有gent抗性 我做的基因不是致死基因 抗生素交叉抗性的问题，我试过辅助菌和供体菌两种菌不抗羧卞，受体菌不抗kana 麻烦帮我在分析一下可能还是哪些方面的问题 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-02-26 19:06:24