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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR退火温度在一定范围内越低越容易扩出来目的片段么？
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machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] PCR退火温度在一定范围内越低越容易扩出来目的片段么？ 已有1人参与

PCR退火温度在一定范围内越低越容易扩出来目的片段么？有没有相对低三四度出不来，但是提高三四度却扩出来的情况？
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1楼 2016-01-30 16:45:14
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ncuskxinxin

新虫 (正式写手)
这个不一定的，你可以设一个温度梯度，做一个梯度PCR，一般温度只会影响条带亮度的

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2楼2016-01-30 21:01:15
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子君与雪

新虫 (初入文坛)
一般温度偏高一点，特异性高    引物不同，退货温度不同  还是要做梯度PCR确定该引物特定的退火温度  并且一批待测样里，会有个别样品的退火温度有偏差，有杂带时可以做切胶回收

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3楼2016-01-30 22:48:26
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Xie_Zijing

新虫 (初入文坛)
有，有时候一两度的差别都有可能没有条带

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4楼2016-01-31 08:39:28
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度越低，引物序列在此低温下越容易与模板结合，但是降低退火也是双刃剑，退火过低容易造成引物结合到别的位置从而造成非特异性扩增。会扩增出很多杂带。
对于PCR如果一开始扩增效果不好，可以使用梯度PCR的方式寻求最合适的退火温度，也可以用降落伞PCR来保证扩增产物的特异性。
但最常见的情况是一开始扩增不出来，使用梯度PCR之后还是扩增不出来，这个跟模板和引物都有关系的，换引物是最直接的解决方式
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5楼2016-02-01 11:53:33
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