应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR退火温度在一定范围内越低越容易扩出来目的片段么？
51/1返回列表
查看: 4157  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] PCR退火温度在一定范围内越低越容易扩出来目的片段么？ 已有1人参与

PCR退火温度在一定范围内越低越容易扩出来目的片段么？有没有相对低三四度出不来，但是提高三四度却扩出来的情况？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-30 16:45:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ncuskxinxin

新虫 (正式写手)
这个不一定的，你可以设一个温度梯度，做一个梯度PCR，一般温度只会影响条带亮度的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-30 21:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子君与雪

新虫 (初入文坛)
一般温度偏高一点，特异性高    引物不同，退货温度不同  还是要做梯度PCR确定该引物特定的退火温度  并且一批待测样里，会有个别样品的退火温度有偏差，有杂带时可以做切胶回收

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-01-30 22:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Xie_Zijing

新虫 (初入文坛)
有，有时候一两度的差别都有可能没有条带

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-31 08:39:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度越低，引物序列在此低温下越容易与模板结合，但是降低退火也是双刃剑，退火过低容易造成引物结合到别的位置从而造成非特异性扩增。会扩增出很多杂带。
对于PCR如果一开始扩增效果不好，可以使用梯度PCR的方式寻求最合适的退火温度，也可以用降落伞PCR来保证扩增产物的特异性。
但最常见的情况是一开始扩增不出来，使用梯度PCR之后还是扩增不出来，这个跟模板和引物都有关系的，换引物是最直接的解决方式
赞一下 回复此楼
5楼2016-02-01 11:53:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 machao8405 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭