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machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] PCR退火温度在一定范围内越低越容易扩出来目的片段么? 已有1人参与

PCR退火温度在一定范围内越低越容易扩出来目的片段么?有没有相对低三四度出不来,但是提高三四度却扩出来的情况?
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ncuskxinxin

新虫 (正式写手)

这个不一定的,你可以设一个温度梯度,做一个梯度PCR,一般温度只会影响条带亮度的

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2楼2016-01-30 21:01:15
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子君与雪

新虫 (初入文坛)

一般温度偏高一点,特异性高    引物不同,退货温度不同  还是要做梯度PCR确定该引物特定的退火温度  并且一批待测样里,会有个别样品的退火温度有偏差,有杂带时可以做切胶回收

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-30 22:48:26
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Xie_Zijing

新虫 (初入文坛)

有,有时候一两度的差别都有可能没有条带

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4楼2016-01-31 08:39:28
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火温度越低,引物序列在此低温下越容易与模板结合,但是降低退火也是双刃剑,退火过低容易造成引物结合到别的位置从而造成非特异性扩增。会扩增出很多杂带。
对于PCR如果一开始扩增效果不好,可以使用梯度PCR的方式寻求最合适的退火温度,也可以用降落伞PCR来保证扩增产物的特异性。
但最常见的情况是一开始扩增不出来,使用梯度PCR之后还是扩增不出来,这个跟模板和引物都有关系的,换引物是最直接的解决方式
5楼2016-02-01 11:53:33
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