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梦沁竹香

新虫 (初入文坛)

[求助] 用Tris-HCl作为缓冲液将蛋白纯化,进行HPLC,怎么除去Tris-HCl产生的离子峰呢 已有1人参与

我将自己的基因连在pET29a上,诱导表达蛋白,破碎时用Tris-HCl作为缓冲液,将蛋白用Ni柱纯化透析后,进行酶活反应,这个反应需要加FAD,NADH,NADPH,我的产物只溶于水,不溶于二氯甲烷等有机溶剂,酶反应后,我煮沸,直接吸上清过滤后进行HPLC,这样会产生很多离子峰,而我的产物出峰时间和离子峰一样,这样怎么办呢,又不能萃取,怎么才能出去Tris-HCl它们产生的离子峰呢,,

用Tris-HCl作为缓冲液将蛋白纯化,进行HPLC,怎么除去Tris-HCl产生的离子峰呢
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未老的黄

铁虫 (小有名气)

我跑液相用pbs缓冲液有溶剂峰的,但是和我的峰不在一起,你可以摸索一下条件,把峰分开,耗点时间

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-01-23 16:28:28
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未老的黄

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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破碎缓冲液不能换吗

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-01-23 00:21:18
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梦沁竹香

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 未老的黄 at 2016-01-23 00:21:18
破碎缓冲液不能换吗

PBS也有离子峰,水倒是没峰,就是怕酶在水中会失活,不知道还有什么缓冲液不出峰,又能保护酶的活性
3楼2016-01-23 10:55:02
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