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梦沁竹香

新虫 (初入文坛)

[求助] 用Tris-HCl作为缓冲液将蛋白纯化，进行HPLC，怎么除去Tris-HCl产生的离子峰呢 已有1人参与

我将自己的基因连在pET29a上，诱导表达蛋白，破碎时用Tris-HCl作为缓冲液，将蛋白用Ni柱纯化透析后，进行酶活反应，这个反应需要加FAD,NADH,NADPH,我的产物只溶于水，不溶于二氯甲烷等有机溶剂，酶反应后，我煮沸，直接吸上清过滤后进行HPLC，这样会产生很多离子峰，而我的产物出峰时间和离子峰一样，这样怎么办呢，又不能萃取，怎么才能出去Tris-HCl它们产生的离子峰呢，，

用Tris-HCl作为缓冲液将蛋白纯化，进行HPLC，怎么除去Tris-HCl产生的离子峰呢
图片1.png
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1楼 2016-01-22 22:46:36
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未老的黄

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
破碎缓冲液不能换吗

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2楼2016-01-23 00:21:18
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梦沁竹香

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 未老的黄 at 2016-01-23 00:21:18
破碎缓冲液不能换吗

PBS也有离子峰，水倒是没峰，就是怕酶在水中会失活，不知道还有什么缓冲液不出峰，又能保护酶的活性
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3楼2016-01-23 10:55:02
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未老的黄

铁虫 (小有名气)
我跑液相用pbs缓冲液有溶剂峰的，但是和我的峰不在一起，你可以摸索一下条件，把峰分开，耗点时间

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4楼2016-01-23 16:28:28
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