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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质电泳，SDS-PAGE求指教
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一个不小心就

金虫 (正式写手)

[求助] 蛋白质电泳，SDS-PAGE求指教 已有5人参与

头疼！！求大家指教。
我跑SDS-PAGE的时候胶总是变形，如图所示，蓝色的那条线是溴酚蓝。注意：上样孔有点扭曲，两层胶的分界线不直，这都是跑胶以后造成的。
跑胶条件：60V，跑10h，室温不高于6℃。灌胶的时候充分摇均匀了。

蛋白质电泳，SDS-PAGE求指教
变形凝胶.jpg
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1楼 2016-01-22 10:30:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2016-01-22 10:47:20
出现过这种情况，但是实在电压太高的情况下出现的。你这个是不是跑太长时间了

我觉的应该是的。但是的蛋白是时间短了跑不开，真是个棘手问题，请问有没有什么建议
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6楼2016-01-22 13:54:27
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反应链

新虫 (正式写手)
If electrophorsis is carried out at low temperatures, use lithium dodecyle sulfate (LiDS) instead of SDS. LiDS does not precipitate at low temperatures.
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3楼2016-01-22 11:18:26
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by swlsangon at 2016-01-22 12:18:05
跑胶时间太久导致的，一般跑胶两个小时左右就可以了

时间短了条带分不开，即使换成6%的胶也效果也不好，而且似乎更容易变形。请问有什么可以解决的方法吗？
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5楼2016-01-22 13:52:27
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫
引用回帖:
9楼: Originally posted by 一个不小心就 at 2016-01-22 14:58:02
应该在50kD~100kD左右。跑胶的时候不加变性剂。同时分离胶中含有1%的羧甲基纤维素，这个会阻碍蛋白移动。...

上下层胶你在配的时候要压胶。使界面平滑，然后可能是样品没有煮好。
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生命在于运动
10楼2016-01-22 16:33:19
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by sskyy at 2016-01-24 23:19:36
也有可能，加胶之前要加点水水检查是否漏水...

不会漏的，制了好多胶了，老手
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29楼2016-01-25 10:43:53
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普通回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-23 22:43:17
出现过这种情况，但是实在电压太高的情况下出现的。你这个是不是跑太长时间了
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2楼2016-01-22 10:47:20
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫
跑胶时间太久导致的，一般跑胶两个小时左右就可以了
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生命在于运动
4楼2016-01-22 12:18:05
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-22 11:18:26
If electrophorsis is carried out at low temperatures, use lithium dodecyle sulfate (LiDS) instead of SDS. LiDS does not precipitate at low temperatures.

学到了，受教
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7楼2016-01-22 13:54:41
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫
引用回帖:
5楼: Originally posted by 一个不小心就 at 2016-01-22 13:52:27
时间短了条带分不开，即使换成6%的胶也效果也不好，而且似乎更容易变形。请问有什么可以解决的方法吗？...

你的蛋白分子量多大啊？
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生命在于运动
8楼2016-01-22 14:37:28
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by swlsangon at 2016-01-22 14:37:28
你的蛋白分子量多大啊？...

应该在50kD~100kD左右。跑胶的时候不加变性剂。同时分离胶中含有1%的羧甲基纤维素，这个会阻碍蛋白移动。
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9楼2016-01-22 14:58:02
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