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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质电泳，SDS-PAGE求指教
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
30楼: Originally posted by neuboron at 2016-01-25 13:36:03
你是用SDS-PAGE跑非变性蛋白样品吗？是不是蛋白上样量太大了？

变性的，上的样里面SDS终浓度2%。目的蛋白分子量应该40-100KD左右，不算大啊。我跑的样是摇瓶培养后的上清，里面应该还有其他蛋白，不知道有没有影响
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31楼2016-01-25 16:08:39
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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)
凝胶时间最好长一些，现在气温低了可能更麻烦些，做完胶以后可以放25℃保存，时间也可以长一些，不过温度太高也不好
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32楼2016-01-25 17:58:55
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yuqing_guo

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 一个不小心就 at 2016-01-25 10:40:26
应该是跑的时间过长了造成的。请问用水清洗以后，你们一般是用什么把水弄干的？我是用滤纸吸的。...

我也是滤纸吸的

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33楼2016-01-26 00:20:29
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
32楼: Originally posted by sdjnyxn123 at 2016-01-25 17:58:55
凝胶时间最好长一些，现在气温低了可能更麻烦些，做完胶以后可以放25℃保存，时间也可以长一些，不过温度太高也不好

我这么做了，不过胶跑了3h的时候还是开始略有变形，我先生80V大概一个多小时，然后切100V一个多小时开始有点变形，吓的我赶紧把电压降了。
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34楼2016-01-26 13:29:11
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yujun1214

木虫 (著名写手)
线压的不直，拔梳子拔的也不好，很容易跑歪的，做慢点，尽量让它直点
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35楼2016-01-26 15:17:22
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
35楼: Originally posted by yujun1214 at 2016-01-26 15:17:22
线压的不直，拔梳子拔的也不好，很容易跑歪的，做慢点，尽量让它直点

拔梳子的时候老容易歪了，不过我都会拿针捋直了再跑
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36楼2016-01-26 18:28:02
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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)
引用回帖:
36楼: Originally posted by 一个不小心就 at 2016-01-26 18:28:02
拔梳子的时候老容易歪了，不过我都会拿针捋直了再跑...

在缓冲液里拔梳子比较好

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37楼2016-01-27 22:49:57
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
37楼: Originally posted by sdjnyxn123 at 2016-01-27 22:49:57
在缓冲液里拔梳子比较好
...

就是这么干的。不过还是会弯曲，而且我保证，我拔的时候绝对是竖直向上的。
不过弯就弯把，拿针捋一下就直了。
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38楼2016-01-27 23:34:12
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