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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质电泳，SDS-PAGE求指教
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川大太行

金虫 (正式写手)
我也觉得是跑的时间太长了，你可以提高电压缩短时间试试
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不惧不惑向阳而生
11楼2016-01-22 19:51:52
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 一个不小心就 at 2016-01-22 13:54:27
我觉的应该是的。但是的蛋白是时间短了跑不开，真是个棘手问题，请问有没有什么建议...

我的蛋白70kda, 一般120的电压跑2个小时，我们用的是买来的梯度胶，不知道自己制的胶会怎么样。但是我觉得60v 10h这个条件不太合适，以前国内他们自己制的胶好像用150V还是200V跑的，我记不清楚了，但是肯定超过100V。
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12楼2016-01-23 01:29:45
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lvsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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一个不小心就: 金币+3 2016-01-23 13:44:43
以前的实验室几十人几乎无一例外的用200V跑胶，40分钟到个把小时跑完。室温二十一二度，跑完时有点发热，估计最高能达到30度以上。楼主提高电压以加快速度看看问题能否解决？
另外是否存在胶的边缘厚度与中间不一致的问题呢？还有电极丝是否变形了？拉直了看看。
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13楼2016-01-23 06:39:29
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noblefire

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一个不小心就: 金币+4 2016-01-23 13:46:23
胶是不是新鲜配置的，你跑的太谨慎了。我们实验室如果不是需要发表文章用一般用200V甚至到240V进行电泳（BioRad Mini Cell）。这样电泳半个小时就可以进行染色观察了，虽然不直但是比你这个强多了。你跑的快一点试一下。
也肯能是胶本身的问题，上面压的时候不用ddH2O，换一个水饱和正丁醇封分离胶，我曾经尝试过，的确分里面很平，后来因为味道太大，就不用了。
上面两个方法同时尝试看看是不是会好一些。
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14楼2016-01-23 10:17:46
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wyalin

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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别加样品，只跑溴酚蓝，你再看看，就知道哪儿的问题了
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15楼2016-01-23 12:11:34
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pandezhuo

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
一个不小心就: 金币+3 2016-01-23 13:45:22
如果你只是跑小胶，这么长的时间肯定是有问题。第一，检查下分离胶和浓缩胶的浓度。第二，配胶的问题，分离胶的凝固时间在十五分钟到三十分钟，分离胶灌好后要用70%乙醇封胶，这样才能保证分离胶面成直线。配浓缩胶前，要降乙醇倒掉，用缓冲液洗两遍后再灌浓缩胶。配好胶后最好过夜再用。第三，电泳时可以用恒压也可以用恒流，我们是使用恒流，浓缩胶10mA，分离胶20mA，总共3个半小时。

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16楼2016-01-23 12:50:24
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by swlsangon at 2016-01-22 16:33:19
上下层胶你在配的时候要压胶。使界面平滑，然后可能是样品没有煮好。...

是跑的时间长了造成的，我缩短了时间胶还是好的。只是条带分的不是太开
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17楼2016-01-23 13:42:43
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 川大太行 at 2016-01-22 19:51:52
我也觉得是跑的时间太长了，你可以提高电压缩短时间试试

原因如你所说
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18楼2016-01-23 13:43:43
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2016-01-23 01:29:45
我的蛋白70kda, 一般120的电压跑2个小时，我们用的是买来的梯度胶，不知道自己制的胶会怎么样。但是我觉得60v 10h这个条件不太合适，以前国内他们自己制的胶好像用150V还是200V跑的，我记不清楚了，但是肯定超过10 ...

嗯嗯，按你的建议试试
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19楼2016-01-23 13:44:16
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memorize1991

木虫 (正式写手)
胶上好后，先电泳一会儿再加样，之前我也跑出一条斜线。

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20楼2016-01-23 15:09:58
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