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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 关于大肠杆菌诱导表达
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by a2703521 at 2016-01-22 12:04:15
20℃诱导，过夜一般超过15h就可以了，如果蛋白稳定性好的话可以适当延长时间，不过最好不要超过20h，不然很容易溶菌，而且氨苄抗性的菌种超过20h还容易长杂菌，会影响蛋白的质量和产量。0.5的诱导剂用量差不多了， ...

多谢啦，结果出来了，20度，0.4mM诱导剂16h，过柱后用了8ml洗脱液，第二天本来打算处理柱子，又加了5ml洗脱液，发现还有目的蛋白，浓度都不多，有些弱杂带，不过对我来说也算不错啦，开学再做时就用洗脱液多孵育时间，之前时间5min太短。谢谢你啦

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生物-医药
11楼2016-01-25 15:36:53
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a2703521

金虫 (小有名气)

123
引用回帖:
11楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2016-01-25 15:36:53
多谢啦，结果出来了，20度，0.4mM诱导剂16h，过柱后用了8ml洗脱液，第二天本来打算处理柱子，又加了5ml洗脱液，发现还有目的蛋白，浓度都不多，有些弱杂带，不过对我来说也算不错啦，开学再做时就用洗脱液多孵育时 ...

不用客气，以后多交流交流，互相学习！
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12楼2016-01-26 15:02:34
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暖阳123456

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2016-01-25 15:24:22
结果出来了，我给自己回个贴吧，试了26度和30度诱导，也没有包含体了，对比后发现还是22度低温诱导上清中比较多，于是大体积诱导时做了20度0.5mM诱导了16h，虽然不多，但结果还算满意，这样终于可以回家好好过年喽～ ...

你好，我想请问一下，37度出现包涵体，降低温度就会减少吗？iptg浓度用多少比较合适？表达蛋白酶的话，是需要信号肽还是不需要，我看到一篇文献说是无信号肽表达了，有信号肽并没有表达。

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13楼2016-04-11 22:53:05
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
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14楼2016-05-21 14:06:00
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