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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌诱导表达已有2人参与

用的是pet29b,我的蛋白37度3h诱导后全部是包涵体,很明显,上清基本无。然后22度诱导11h后沉淀中没有目的蛋白,上清中少,但比之前要多。这是不是说明,我应该在37度和22度之间摸条件呢?还有我听说低iptg有助于降低包涵体,但是为何我觉得1mM的好像比0.1mM和0.02mM的好像上清中要多一点呢
还有就是,如果大体积诱导,多少升细菌液合适呢?
问题比较多,谢谢各位啦
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生物-医药
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

结果出来了,我给自己回个贴吧,试了26度和30度诱导,也没有包含体了,对比后发现还是22度低温诱导上清中比较多,于是大体积诱导时做了20度0.5mM诱导了16h,虽然不多,但结果还算满意,这样终于可以回家好好过年喽~~感谢大家了,以及努力了那么久的自己

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生物-医药
10楼2016-01-25 15:24:22
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

怎么没人理我吗?
生物-医药
2楼2016-01-19 17:59:06
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eleep

新虫 (初入文坛)

听意思是为了上清蛋白多?我们都是要沉淀啊,听不懂

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3楼2016-01-20 08:41:54
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by eleep at 2016-01-20 08:41:54
听意思是为了上清蛋白多?我们都是要沉淀啊,听不懂

哦哦,要沉淀的话需要复性吧,我们是要上清

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生物-医药
4楼2016-01-20 09:50:43
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