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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

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专业: 免疫生物学

[求助] 关于大肠杆菌诱导表达已有2人参与

用的是pet29b，我的蛋白37度3h诱导后全部是包涵体，很明显，上清基本无。然后22度诱导11h后沉淀中没有目的蛋白，上清中少，但比之前要多。这是不是说明，我应该在37度和22度之间摸条件呢？还有我听说低iptg有助于降低包涵体，但是为何我觉得1mM的好像比0.1mM和0.02mM的好像上清中要多一点呢
还有就是，如果大体积诱导，多少升细菌液合适呢？
问题比较多，谢谢各位啦

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生物-医药

1楼 2016-01-19 14:38:14

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a2703521

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

11楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2016-01-25 15:36:53
多谢啦，结果出来了，20度，0.4mM诱导剂16h，过柱后用了8ml洗脱液，第二天本来打算处理柱子，又加了5ml洗脱液，发现还有目的蛋白，浓度都不多，有些弱杂带，不过对我来说也算不错啦，开学再做时就用洗脱液多孵育时 ...

不用客气，以后多交流交流，互相学习！