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真果粒

新虫 (初入文坛)

[求助] 引物的长度为10bp 已有2人参与

想从1300bp的片段上P  880bp左右的目的片段,于是就设计了一对长度为10bp左右的引物。计算出的TM值只有13℃左右,但pcr仪能设定的最低退火温度是30℃。于是只能用30--40℃进行温度梯度进行PCR,但结果如下(左边六条带)。有没有人用过这么短的引物进行过PCR呢?或者我这想法根本就行不通?求大神指教。。

引物的长度为10bp
IMG_20160118_164201.jpg
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徘徊在街头,不知何去何从。
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新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-18 22:58:25
1、梯度范围设大点,30度---56度,
2、重新设计引物,就算有错配也不所谓的,只要不太离谱。
3楼2016-01-18 21:28:00
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xhp_1638

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-18 22:58:10
引物Tm值要在50~65℃。
发展才是硬道理!
2楼2016-01-18 21:12:04
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用什么软件设计引物额,没提示你这个引物的可行性么

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-01-19 07:33:51
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