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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR的结果没有目的片段，换过很多条件。求大神指导！
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR的结果没有目的片段，换过很多条件。求大神指导！ 已有14人参与

第一次用高保真酶很顺利扩出来了大部分基因，可是后面用普通酶就扩不出来了

改变的条件就俩：1、高保真酶换成了普通酶；2、cDNA量加大了，从30ng左右加达到了300ng左右。

现在换了很多退火温度，都不行！条带都在marker最下面一条那。求帮助！！

图是今天跑的，左边是引物、cDNA。右边是扩增产物。

图中分别是引物（<100）,cDNA（中间），PCR产物（<100）

PCR的结果没有目的片段，换过很多条件。求大神指导！
1.png
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总是记不起密码~~~
1楼 2016-01-15 11:11:30
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)
哦，对了，还有就是引物从2ul加到了4ul。
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总是记不起密码~~~
2楼2016-01-15 11:19:03
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-15 11:23:26
没看见高保真酶扩增出来了，按道理Taq的扩增效率是最强的啊~没理由扩不出来……

高保真酶扩增的图没有放上来

这个是普通酶扩增的。。。。扩不出来啊
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总是记不起密码~~~
6楼2016-01-15 12:41:51
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ccqqsunshine at 2016-01-15 11:28:56
把变性温度升高，退火温度降低

嗯嗯，尝试了变性温度升高，但是退火温度没降。没有出来，我会再试一下的，谢谢。
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总是记不起密码~~~
7楼2016-01-15 12:43:18
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2016-01-16 08:55:40
其实只要是扩增不出来一般都是换引物，优化条件很难弄的，相信我

好哒。。。。谢谢
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总是记不起密码~~~
16楼2016-01-18 09:39:39
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 大孙20111987 at 2016-01-16 09:46:49
建议换一下引物试试

好哒~~感谢~~
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总是记不起密码~~~
17楼2016-01-18 09:47:40
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by knightdream at 2016-01-18 16:28:59
cDNA要少加，引物也要少加。一做不出来就增加用量，这是不对的，也是常犯的错误。

恩恩，是的。我就是多加了。
扩增出来后想提高PCR产量，就又重新多加了量。
昨天又把量降下去了，就可以了。谢谢啊。
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总是记不起密码~~~
22楼2016-01-19 09:44:33
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