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当归加首乌

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR的结果没有目的片段,换过很多条件。求大神指导! 已有14人参与

第一次用高保真酶很顺利扩出来了大部分基因,可是后面用普通酶就扩不出来了

改变的条件就俩:1、高保真酶换成了普通酶;2、cDNA量加大了,从30ng左右加达到了300ng左右。

现在换了很多退火温度,都不行!条带都在marker最下面一条那。求帮助!!

图是今天跑的,左边是引物、cDNA。右边是扩增产物。

图中分别是引物(<100),cDNA(中间),PCR产物(<100)

PCR的结果没有目的片段,换过很多条件。求大神指导!
1.png
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by knightdream at 2016-01-18 16:28:59
cDNA要少加,引物也要少加。一做不出来就增加用量,这是不对的,也是常犯的错误。

恩恩,是的。我就是多加了。
扩增出来后想提高PCR产量,就又重新多加了量。
昨天又把量降下去了,就可以了。谢谢啊。
总是记不起密码~~~
22楼2016-01-19 09:44:33
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)

哦,对了,还有就是引物从2ul加到了4ul。
总是记不起密码~~~
2楼2016-01-15 11:19:03
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lifechuteng

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换条件治标不治本,换引物才是王道啊!

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-15 11:21:31
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

没看见高保真酶扩增出来了,按道理Taq的扩增效率是最强的啊~没理由扩不出来……

发自小木虫Android客户端
4楼2016-01-15 11:23:26
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