24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1632  |  回复: 9

tuhangul622

金虫 (小有名气)

[求助] 淀粉酶的分离纯化 已有2人参与

大侠们好!哪位大侠做过淀粉酶分离纯化方面的研究?我现在在分离纯化一种耐高温的淀粉酶,通过测酶活,跑活性电泳已经确定了这个酶的存在,但是因为蛋白质浓度太低,跑蛋白质电泳没有跑出来,甚至只有暗暗地条带,没有办法看清楚,这还是我浓缩以后的结果,这种情况下若用常规的离子交换层析法,那我的样品会更加稀释,得到的量就更小了,请问,谁能建议更好的分离纯化方法,谢谢
回复此楼
人的一生可以没有荣誉和鲜花,可不能没有自尊!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
既然目标耐高温,那就就先80度水浴30分钟,让杂蛋白变性,然后离心或过滤,然后硫酸氨盐析,然后将盐析的沉淀溶解过疏水层析,或者先煮,在利益交换,在超滤浓缩,或者先浓缩,在煮,在离心,在层析,方式多的去了,不要想,要多试多做,祝顺利

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-01-09 02:46:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maomaochongk

新虫 (初入文坛)

你好,我看到你的帖子,硫酸铵沉淀后电泳,没有条带,目前我的实验也出现了类似问题,我的具体情况:淀粉酶发酵液--硫酸铵沉淀--重新溶解--透析脱盐--浓缩--DEAE-52柱--电泳,其中过柱后的A280大约0.5,我浓缩后电泳,也没有条带(但有水解圈活性),过柱前浓缩液也没有条带,我感觉吸光度值足够高了,但是电泳结果除了marker,没有条带。不知道你出现这种情况了吗,多指点,谢谢。
3楼2016-01-17 15:46:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by maomaochongk at 2016-01-17 15:46:59
你好,我看到你的帖子,硫酸铵沉淀后电泳,没有条带,目前我的实验也出现了类似问题,我的具体情况:淀粉酶发酵液--硫酸铵沉淀--重新溶解--透析脱盐--浓缩--DEAE-52柱--电泳,其中过柱后的A280大约0.5,我浓缩后电泳 ...

我的情况跟你一样,有水解圈但是蛋白电泳没有条带,浓缩后也没有,硫酸铵沉淀也没有,然后我提高了胶浓度至18%,有很暗的条带,不知道怎么做了

发自小木虫Android客户端
人的一生可以没有荣誉和鲜花,可不能没有自尊!
4楼2016-01-18 09:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc2015

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告,其它区发广告仍属违规 2016-05-05 22:13:10
本帖内容被屏蔽

5楼2016-02-15 11:48:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

洁宝儿

铜虫 (初入文坛)

您好,我是做低温淀粉酶的,我想咨询你一个问题,你是如何确定出你的耐高温淀粉酶是α淀粉酶还是β淀粉酶又或者是其他的?我感觉我的低温淀粉酶可能是我现在很纠结这个问题,希望您能帮我解答,谢谢
6楼2016-02-18 10:22:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 洁宝儿 at 2016-02-18 10:22:56
您好,我是做低温淀粉酶的,我想咨询你一个问题,你是如何确定出你的耐高温淀粉酶是α淀粉酶还是β淀粉酶又或者是其他的?我感觉我的低温淀粉酶可能是我现在很纠结这个问题,希望您能帮我解答,谢谢

你好,这个主要是要看水解产物,你要先测水解产物是葡萄糖还是麦芽糖还是糊精,才能确定你这个酶是哪一种淀粉酶

发自小木虫Android客户端
人的一生可以没有荣誉和鲜花,可不能没有自尊!
7楼2016-02-19 00:36:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

洁宝儿

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by tuhangul622 at 2016-02-19 00:36:44
你好,这个主要是要看水解产物,你要先测水解产物是葡萄糖还是麦芽糖还是糊精,才能确定你这个酶是哪一种淀粉酶
...

你好,那我是不是需要先分离提纯,再作用于底物看它的产物是什么?如果不分离,发酵液中的酶应该有很多种,可能不止一个有作用,那产物种类也就多了,这个时候是不是无法确定是哪种酶起的作用?
8楼2016-02-19 10:18:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 洁宝儿 at 2016-02-19 10:18:04
你好,那我是不是需要先分离提纯,再作用于底物看它的产物是什么?如果不分离,发酵液中的酶应该有很多种,可能不止一个有作用,那产物种类也就多了,这个时候是不是无法确定是哪种酶起的作用?...

嗯,是需要分离纯化的

发自小木虫Android客户端
人的一生可以没有荣誉和鲜花,可不能没有自尊!
9楼2016-02-19 10:54:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

洁宝儿

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by tuhangul622 at 2016-02-19 10:54:28
嗯,是需要分离纯化的
...

好的,谢谢

发自小木虫IOS客户端
10楼2016-02-20 11:50:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tuhangul622 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学求调剂,各位老师看看我!!! +3 祁祺祺 2026-03-25 3/150 2026-03-27 13:25 by shangxh
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +9 NIFFFfff 2026-03-20 9/450 2026-03-27 10:13 by dick_runner
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分,英语已过四六级,六级521,求调剂 +3 美味可乐鸡翅 2026-03-26 3/150 2026-03-27 08:46 by hxsm
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 289材料与化工(085600)B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程(085601) +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
信息提示
请填处理意见