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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 淀粉酶的分离纯化
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

[求助] 淀粉酶的分离纯化 已有2人参与

大侠们好！哪位大侠做过淀粉酶分离纯化方面的研究？我现在在分离纯化一种耐高温的淀粉酶，通过测酶活，跑活性电泳已经确定了这个酶的存在，但是因为蛋白质浓度太低，跑蛋白质电泳没有跑出来，甚至只有暗暗地条带，没有办法看清楚，这还是我浓缩以后的结果，这种情况下若用常规的离子交换层析法，那我的样品会更加稀释，得到的量就更小了，请问，谁能建议更好的分离纯化方法，谢谢
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1楼 2016-01-06 10:39:44
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
既然目标耐高温，那就就先80度水浴30分钟，让杂蛋白变性，然后离心或过滤，然后硫酸氨盐析，然后将盐析的沉淀溶解过疏水层析，或者先煮，在利益交换，在超滤浓缩，或者先浓缩，在煮，在离心，在层析，方式多的去了，不要想，要多试多做，祝顺利

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2楼2016-01-09 02:46:37
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)
你好，我看到你的帖子，硫酸铵沉淀后电泳，没有条带，目前我的实验也出现了类似问题，我的具体情况：淀粉酶发酵液--硫酸铵沉淀--重新溶解--透析脱盐--浓缩--DEAE-52柱--电泳，其中过柱后的A280大约0.5，我浓缩后电泳，也没有条带（但有水解圈活性），过柱前浓缩液也没有条带，我感觉吸光度值足够高了，但是电泳结果除了marker，没有条带。不知道你出现这种情况了吗，多指点，谢谢。
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3楼2016-01-17 15:46:59
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tuhangul622

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by maomaochongk at 2016-01-17 15:46:59
你好，我看到你的帖子，硫酸铵沉淀后电泳，没有条带，目前我的实验也出现了类似问题，我的具体情况：淀粉酶发酵液--硫酸铵沉淀--重新溶解--透析脱盐--浓缩--DEAE-52柱--电泳，其中过柱后的A280大约0.5，我浓缩后电泳 ...

我的情况跟你一样，有水解圈但是蛋白电泳没有条带，浓缩后也没有，硫酸铵沉淀也没有，然后我提高了胶浓度至18%，有很暗的条带，不知道怎么做了

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4楼2016-01-18 09:24:58
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hc2015

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告，其它区发广告仍属违规 2016-05-05 22:13:10
本帖内容被屏蔽
5楼2016-02-15 11:48:37
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洁宝儿

铜虫 (初入文坛)
您好，我是做低温淀粉酶的，我想咨询你一个问题，你是如何确定出你的耐高温淀粉酶是α淀粉酶还是β淀粉酶又或者是其他的？我感觉我的低温淀粉酶可能是我现在很纠结这个问题，希望您能帮我解答，谢谢
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6楼2016-02-18 10:22:56
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tuhangul622

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 洁宝儿 at 2016-02-18 10:22:56
您好，我是做低温淀粉酶的，我想咨询你一个问题，你是如何确定出你的耐高温淀粉酶是α淀粉酶还是β淀粉酶又或者是其他的？我感觉我的低温淀粉酶可能是我现在很纠结这个问题，希望您能帮我解答，谢谢

你好，这个主要是要看水解产物，你要先测水解产物是葡萄糖还是麦芽糖还是糊精，才能确定你这个酶是哪一种淀粉酶

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7楼2016-02-19 00:36:44
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洁宝儿

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tuhangul622 at 2016-02-19 00:36:44
你好，这个主要是要看水解产物，你要先测水解产物是葡萄糖还是麦芽糖还是糊精，才能确定你这个酶是哪一种淀粉酶
...

你好，那我是不是需要先分离提纯，再作用于底物看它的产物是什么？如果不分离，发酵液中的酶应该有很多种，可能不止一个有作用，那产物种类也就多了，这个时候是不是无法确定是哪种酶起的作用？
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8楼2016-02-19 10:18:04
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tuhangul622

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 洁宝儿 at 2016-02-19 10:18:04
你好，那我是不是需要先分离提纯，再作用于底物看它的产物是什么？如果不分离，发酵液中的酶应该有很多种，可能不止一个有作用，那产物种类也就多了，这个时候是不是无法确定是哪种酶起的作用？...

嗯，是需要分离纯化的

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9楼2016-02-19 10:54:28
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洁宝儿

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by tuhangul622 at 2016-02-19 10:54:28
嗯，是需要分离纯化的
...

好的，谢谢

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10楼2016-02-20 11:50:07
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