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tuhangul622

金虫 (小有名气)

[求助] 淀粉酶的分离纯化 已有2人参与

大侠们好!哪位大侠做过淀粉酶分离纯化方面的研究?我现在在分离纯化一种耐高温的淀粉酶,通过测酶活,跑活性电泳已经确定了这个酶的存在,但是因为蛋白质浓度太低,跑蛋白质电泳没有跑出来,甚至只有暗暗地条带,没有办法看清楚,这还是我浓缩以后的结果,这种情况下若用常规的离子交换层析法,那我的样品会更加稀释,得到的量就更小了,请问,谁能建议更好的分离纯化方法,谢谢
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
既然目标耐高温,那就就先80度水浴30分钟,让杂蛋白变性,然后离心或过滤,然后硫酸氨盐析,然后将盐析的沉淀溶解过疏水层析,或者先煮,在利益交换,在超滤浓缩,或者先浓缩,在煮,在离心,在层析,方式多的去了,不要想,要多试多做,祝顺利

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2楼2016-01-09 02:46:37
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)

你好,我看到你的帖子,硫酸铵沉淀后电泳,没有条带,目前我的实验也出现了类似问题,我的具体情况:淀粉酶发酵液--硫酸铵沉淀--重新溶解--透析脱盐--浓缩--DEAE-52柱--电泳,其中过柱后的A280大约0.5,我浓缩后电泳,也没有条带(但有水解圈活性),过柱前浓缩液也没有条带,我感觉吸光度值足够高了,但是电泳结果除了marker,没有条带。不知道你出现这种情况了吗,多指点,谢谢。
3楼2016-01-17 15:46:59
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by maomaochongk at 2016-01-17 15:46:59
你好,我看到你的帖子,硫酸铵沉淀后电泳,没有条带,目前我的实验也出现了类似问题,我的具体情况:淀粉酶发酵液--硫酸铵沉淀--重新溶解--透析脱盐--浓缩--DEAE-52柱--电泳,其中过柱后的A280大约0.5,我浓缩后电泳 ...

我的情况跟你一样,有水解圈但是蛋白电泳没有条带,浓缩后也没有,硫酸铵沉淀也没有,然后我提高了胶浓度至18%,有很暗的条带,不知道怎么做了

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4楼2016-01-18 09:24:58
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hc2015

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告,其它区发广告仍属违规 2016-05-05 22:13:10
本帖内容被屏蔽

5楼2016-02-15 11:48:37
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洁宝儿

铜虫 (初入文坛)

您好,我是做低温淀粉酶的,我想咨询你一个问题,你是如何确定出你的耐高温淀粉酶是α淀粉酶还是β淀粉酶又或者是其他的?我感觉我的低温淀粉酶可能是我现在很纠结这个问题,希望您能帮我解答,谢谢
6楼2016-02-18 10:22:56
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 洁宝儿 at 2016-02-18 10:22:56
您好,我是做低温淀粉酶的,我想咨询你一个问题,你是如何确定出你的耐高温淀粉酶是α淀粉酶还是β淀粉酶又或者是其他的?我感觉我的低温淀粉酶可能是我现在很纠结这个问题,希望您能帮我解答,谢谢

你好,这个主要是要看水解产物,你要先测水解产物是葡萄糖还是麦芽糖还是糊精,才能确定你这个酶是哪一种淀粉酶

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7楼2016-02-19 00:36:44
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洁宝儿

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by tuhangul622 at 2016-02-19 00:36:44
你好,这个主要是要看水解产物,你要先测水解产物是葡萄糖还是麦芽糖还是糊精,才能确定你这个酶是哪一种淀粉酶
...

你好,那我是不是需要先分离提纯,再作用于底物看它的产物是什么?如果不分离,发酵液中的酶应该有很多种,可能不止一个有作用,那产物种类也就多了,这个时候是不是无法确定是哪种酶起的作用?
8楼2016-02-19 10:18:04
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 洁宝儿 at 2016-02-19 10:18:04
你好,那我是不是需要先分离提纯,再作用于底物看它的产物是什么?如果不分离,发酵液中的酶应该有很多种,可能不止一个有作用,那产物种类也就多了,这个时候是不是无法确定是哪种酶起的作用?...

嗯,是需要分离纯化的

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9楼2016-02-19 10:54:28
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洁宝儿

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by tuhangul622 at 2016-02-19 10:54:28
嗯,是需要分离纯化的
...

好的,谢谢

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10楼2016-02-20 11:50:07
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