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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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胡程

银虫 (小有名气)

[求助] 分子克隆问题求助 已有9人参与

各位同仁:大家好,咨询一个问题。做分子克隆,载体与片段连接后(室温1小时)加入感受态dh5α,冰上30分钟,然后42热激1分钟,37℃,260转摇35分钟,然后离心涂板,过夜长成这个吊样,以前做的都长得挺好,只是这两天问题百出,求分析原因啊,必有重谢。ps:①为了排除涂板问题的干扰,一个是用磁珠涂布的,一个没有磁珠涂板
②为了排除质粒问题,做了一个其他质粒的control。③板子为amp抗性,和我一起做实验的一些人都能长得很好。跪求!!

分子克隆问题求助
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分子克隆问题求助-1
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做最好的自己
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胡程

银虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by elric at 2015-12-28 03:29:25
那会不会是感受态细胞问题?连接问题也可能?只要做好对照,就可以找出问题了。感受态问题,看看其他人用同批次感受态,结果如何?连接问题,你可以直接用载体plasmid转一下试试。...

谢谢,您所说的都做了,我转了空载体,也是这样,另外,同批次的其他人长出来了
做最好的自己
34楼2015-12-29 11:15:59
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yilberg

新虫 (小有名气)

我是这样做的:冰上30min,42度90s,冰上5min,然后过夜,220rpm/min 37度 4小时。离心,涂板,没出现过你这种情况。dh5a 是用的takara

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-12-27 09:30:56
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yilberg

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yilberg at 2015-12-27 09:30:56
我是这样做的:冰上30min,42度90s,冰上5min,然后过夜,220rpm/min 37度 4小时。离心,涂板,没出现过你这种情况。dh5a 是用的takara

过夜是连接的时候。转化不过夜的。打错了

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-12-27 09:32:41
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siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
胡程: 金币+2, 有帮助, 谢谢,希望进一步交流分析。 2015-12-27 14:26:58
我就问你一句,AMP加了多少。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
4楼2015-12-27 11:31:36
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