应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 分子克隆问题求助
54/1返回列表
查看: 2270  |  回复: 47
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

胡程

银虫 (小有名气)

[求助] 分子克隆问题求助 已有9人参与

各位同仁：大家好，咨询一个问题。做分子克隆，载体与片段连接后（室温1小时）加入感受态dh5α，冰上30分钟，然后42热激1分钟，37℃，260转摇35分钟，然后离心涂板，过夜长成这个吊样，以前做的都长得挺好，只是这两天问题百出，求分析原因啊，必有重谢。ps：①为了排除涂板问题的干扰，一个是用磁珠涂布的，一个没有磁珠涂板
②为了排除质粒问题，做了一个其他质粒的control。③板子为amp抗性，和我一起做实验的一些人都能长得很好。跪求！！

分子克隆问题求助
C4639360E0FF7D032EFF9C65B19D48DB.jpg


分子克隆问题求助-1
DD6DB14F5CD252ECE0D12A74CF958234.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
做最好的自己
1楼 2015-12-27 09:21:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡程

银虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by elric at 2015-12-28 03:29:25
那会不会是感受态细胞问题？连接问题也可能？只要做好对照，就可以找出问题了。感受态问题，看看其他人用同批次感受态，结果如何？连接问题，你可以直接用载体plasmid转一下试试。...

谢谢，您所说的都做了，我转了空载体，也是这样，另外，同批次的其他人长出来了
赞一下 回复此楼
做最好的自己
34楼2015-12-29 11:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 48 个回答

yilberg

新虫 (小有名气)
我是这样做的：冰上30min，42度90s，冰上5min，然后过夜，220rpm/min 37度 4小时。离心，涂板，没出现过你这种情况。dh5a 是用的takara

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2015-12-27 09:30:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yilberg

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yilberg at 2015-12-27 09:30:56
我是这样做的：冰上30min，42度90s，冰上5min，然后过夜，220rpm/min 37度 4小时。离心，涂板，没出现过你这种情况。dh5a 是用的takara

过夜是连接的时候。转化不过夜的。打错了

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-12-27 09:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

siriusxuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
胡程: 金币+2, ★有帮助, 谢谢，希望进一步交流分析。 2015-12-27 14:26:58
我就问你一句，AMP加了多少。
赞一下(1人) 回复此楼
此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
4楼2015-12-27 11:31:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 48 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭