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wanglixia815

新虫 (正式写手)

[求助] 高手进来看看,帮忙解决问题,非常感谢 已有5人参与

我做DNA提取和PCR,我的DNeasy plant mini kit 和primer都是2014年2月买的,引物稀释之后,一直在零下20度放着,今天做PCR。发现marker是清楚的。但是样品条带很模糊。。是不引物降解了?第一个图是用DNA样品跑的。带很清楚,应该mini kit是没有问题,还可以继续使用,但是第二张图pcr产物,marker清楚。但是样品条带很模糊,然后我用引物跑了一遍,第二张第二行,那四条带,也很模糊,是不说明引物降解了?还是还有别的问题?

高手进来看看,帮忙解决问题,非常感谢


高手进来看看,帮忙解决问题,非常感谢-1


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wanglixia815

新虫 (正式写手)

对了,用mili q water没有问题吧,在做pcr的时候,

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4楼2015-12-19 15:11:49
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gnot_nail at 2015-12-20 12:52:20
一般来说引物放-20 应该问题不大 PCR条件以前有试验过可行吗 会不会是PCR体系或条件的问题

试过的,去年用的和现在一样的条件,用mili qwater,会不会有影响?

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6楼2015-12-20 15:57:53
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普通回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

引物没有问题,片段也扩增出来了,可能是制胶过程中胶冷却的不均匀造成的,建议重新做快胶电泳时间跑长点。
2楼2015-12-19 12:58:22
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2015-12-19 12:58:22
引物没有问题,片段也扩增出来了,可能是制胶过程中胶冷却的不均匀造成的,建议重新做快胶电泳时间跑长点。

但是j我的marker很清楚呀,胶有问题,marker应该也不清楚吧

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3楼2015-12-19 14:59:47
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般来说引物放-20 应该问题不大 PCR条件以前有试验过可行吗 会不会是PCR体系或条件的问题
5楼2015-12-20 12:52:20
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追梦少年ギ

新虫 (小有名气)

有可能是降解了吧,条带都托尾了。要是胶的问题marker也会跑散的呀。

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7楼2015-12-20 16:42:54
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 追梦少年ギ at 2015-12-20 16:42:54
有可能是降解了吧,条带都托尾了。要是胶的问题marker也会跑散的呀。

对奥,我就得胶是没有问题,一可能引物降解或者被污染了,就不知道mili q water可以不用

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8楼2015-12-20 16:57:44
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wangxiaoguo

木虫 (正式写手)

应该是引物的问题,最好重新合成试试,如果还是这样的话,可能dna有轻微降解。

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202010
9楼2015-12-20 17:55:48
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wanglixia815 at 2015-12-20 15:57:53
试过的,去年用的和现在一样的条件,用mili qwater,会不会有影响?
...

一般来说water不会太大影响吧。。有没有影响你换作自己的ddw一试就知道了。。
10楼2015-12-20 18:42:57
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