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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 高手进来看看，帮忙解决问题，非常感谢
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

[求助] 高手进来看看，帮忙解决问题，非常感谢 已有5人参与

我做DNA提取和PCR，我的DNeasy plant mini kit 和primer都是2014年2月买的，引物稀释之后，一直在零下20度放着，今天做PCR。发现marker是清楚的。但是样品条带很模糊。。是不引物降解了？第一个图是用DNA样品跑的。带很清楚，应该mini kit是没有问题，还可以继续使用，但是第二张图pcr产物，marker清楚。但是样品条带很模糊，然后我用引物跑了一遍，第二张第二行，那四条带，也很模糊，是不说明引物降解了？还是还有别的问题？

高手进来看看，帮忙解决问题，非常感谢


高手进来看看，帮忙解决问题，非常感谢-1


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有点矛盾。有点纠结
1楼 2015-12-19 03:12:08
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
对了，用mili q water没有问题吧，在做pcr的时候，

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有点矛盾。有点纠结
4楼2015-12-19 15:11:49
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gnot_nail at 2015-12-20 12:52:20
一般来说引物放-20 应该问题不大 PCR条件以前有试验过可行吗 会不会是PCR体系或条件的问题

试过的，去年用的和现在一样的条件，用mili qwater，会不会有影响？

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有点矛盾。有点纠结
6楼2015-12-20 15:57:53
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普通回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
引物没有问题，片段也扩增出来了，可能是制胶过程中胶冷却的不均匀造成的，建议重新做快胶电泳时间跑长点。
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。
2楼2015-12-19 12:58:22
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2015-12-19 12:58:22
引物没有问题，片段也扩增出来了，可能是制胶过程中胶冷却的不均匀造成的，建议重新做快胶电泳时间跑长点。

但是j我的marker很清楚呀，胶有问题，marker应该也不清楚吧

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有点矛盾。有点纠结
3楼2015-12-19 14:59:47
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般来说引物放-20 应该问题不大 PCR条件以前有试验过可行吗 会不会是PCR体系或条件的问题
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5楼2015-12-20 12:52:20
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追梦少年ギ

新虫 (小有名气)
有可能是降解了吧，条带都托尾了。要是胶的问题marker也会跑散的呀。

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7楼2015-12-20 16:42:54
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 追梦少年ギ at 2015-12-20 16:42:54
有可能是降解了吧，条带都托尾了。要是胶的问题marker也会跑散的呀。

对奥，我就得胶是没有问题，一可能引物降解或者被污染了，就不知道mili q water可以不用

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有点矛盾。有点纠结
8楼2015-12-20 16:57:44
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wangxiaoguo

木虫 (正式写手)
应该是引物的问题，最好重新合成试试，如果还是这样的话，可能dna有轻微降解。

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202010
9楼2015-12-20 17:55:48
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gnot_nail

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wanglixia815 at 2015-12-20 15:57:53
试过的，去年用的和现在一样的条件，用mili qwater，会不会有影响？
...

一般来说water不会太大影响吧。。有没有影响你换作自己的ddw一试就知道了。。
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10楼2015-12-20 18:42:57
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