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橙子柠檬

金虫 (小有名气)

[交流] PCR产物除目的条带外还有一条很亮的条带,请问如何优化条件? 已有9人参与

PCR一个月啦,目的条带可以得到,就是电泳图中还有一条较明亮的条带,退火温度也升高了,么得用啊,请求大家帮忙,献计献策!

PCR产物除目的条带外还有一条很亮的条带,请问如何优化条件?
IMG_20151216_131225.jpg
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棍子168

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的目的条带切下来可以用,测序一下。估计引物需要重新设计了吧

发自小木虫Android客户端
天道酬勤
2楼2015-12-16 16:37:03
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781055707

木虫 (著名写手)

你阴性是那个呀,引物从新设计吧。
采菊东篱下,悠然见南山。
3楼2015-12-16 17:14:13
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liyu6655

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

4楼2015-12-18 09:23:18
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rwang1108

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我试过一次减少dNTPs,那次成了,你也可以调整一下反应体系

发自小木虫IOS客户端
5楼2015-12-18 09:49:45
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anya50

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
产物非特异性条带多可以试试适当调高退火温度
6楼2015-12-18 10:57:08
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keith_fly

新虫 (初入文坛)

切胶回收,测序
宁静致远
7楼2015-12-18 13:10:54
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橙子柠檬

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 棍子168 at 2015-12-16 16:37:03
你的目的条带切下来可以用,测序一下。估计引物需要重新设计了吧

谢谢啦,老师说切胶会损失的,后面是要测T-RFLP~
8楼2015-12-18 21:08:50
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songjie851

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的目的条带是哪一条?如果上边的是非特异条带,可以试试缩短延伸时间。另外,你可以找一下官网上酶的说明书,比如takara的酶,说明书上就写了怎么优化pcr

发自小木虫IOS客户端
9楼2015-12-19 09:01:36
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vivd娟

金虫 (小有名气)

弥散的厉害啊
10楼2015-12-19 10:34:15
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